Глава 3. Стерилизация Способы стерилизации питательных сред, посуды, инструментов, приборов

При работе в микробиологической лаборатории, а также при различных видах микробиологических производств имеет дело с чистыми культурами микроорганизмов, представляющими собой потомство одной клетки. Ввиду того, что в воздухе и на поверхности предметов (на столах, инструментах, одежде), а также на руках, волосах и т.д. всегда имеется большое количество разнообразных микроорганизмов, следует постоянно заботиться о сохранении чистоты исследуемых культур. Примесь посторонних микроорганизмов может ослабить активность основной культуры, исказить или ослабить технологический процесс, ухудшить качество и уменьшить выход продукта. Для того чтобы не допустить развития посторонней микрофлоры в исследуемых культурах, питательные среды, посуду, инструменты и приборы стерилизуют, лабораторные помещения и рабочие места содержат в чистоте и периодически подвергают специальной обработке, направленной на уничтожение микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях, соблюдают правила асептики при работе с культурами микроорганизмов.

Стерилизация является одним из важнейших и необходимых приёмов в микробиологической практике. Слово «стерилизация» в переводе с латинского означает обеспложивание. В практической работе под стерилизацией понимают методы, применяемые для уничтожения всех форм жизни, как на поверхности, так и после стерилизующих объектов. Микробиологи стерилизуют питательные среды, посуду, различные инструменты и другие необходимые предметы с целью не допустить развития посторонних микроорганизмов в исследуемых культурах. Термин «стерильность» имеет абсолютное значение. Можно говорить только либо о стерильности, либо о пастеризации, но не может быть состояния «частичной» или «неполной стерилизации», «близкого к стерильному», «почти стерильного».

Существуют следующие способы стерилизации:

1. Термическая стерилизация

• прокаливание в пламени горелки

• стерилизация горячим воздухом

• стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавированием)

• дробная стерилизация (тиндализация).

2. Холодная стерилизация

• фильтрование

• химические дезинфицирующие средства

• ультрафиолетовые

Возможность и целесообразность того или иного способа определяется особенностями материала, подлежащего стерилизации, его физическими свойствами и химическим составом, целью исследования.

Стерилизация инструментов и приборов

Мелкие металлические инструменты (петли, иглы, пинцеты, ножницы) стерилизуют прокаливанием в пламени горелки непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно обжигают горлышки колб, пробирок, а также ватные пробки при пересевах культур и розливе сред. В пламени погибают вегетативные клетки и споры микроорганизмов.

Приборы для культивирования микроорганизмов, а также детали к этим приборам, резиновые пробки и платки стерилизуют автоклавированием. Предметы, подлежащие стерилизации в автоклаве, завёртывают в бумагу.

Некоторые предметы (металлические инструменты, мембранные фильтры) иногда стерилизуют длительным кипячением в дистиллированной воде. Однако этим способом с целью стерилизации в микробиологической практике пользуются очень редко в связи с тем, что длительное время кипячение может повредить обрабатываемый материал, а уменьшение времени кипячения может не обеспечить стерилизацию, так как споры некоторых микроорганизмов сохраняют жизнеспособность даже после кипячения в течение нескольких часов.

Предметы, изготовленные из термолабильных пластмасс, например, центрифужные пробирки, стерилизуют ультрафиолетовыми лучами. Время устанавливают экспериментальное. Оно зависит от мощности используемой лампы и расстояния между лампой и объектом. После облучения предметы до использования следует хранить в стерильной посуде.

Стерилизацию предметов из термолабильных пластмасс можно производить и окисью этилена.

Стерилизация стеклянной посуды (Стерилизация горячим воздухом)

Основным способом стерилизации стеклянная посуды, ваты, марли, бумаги является стерилизации горячим воздухом. Она осуществляется в сушильных шкафах при температуре 165-180єС в течение 1,5-2 часов.

Посуду перед стерилизацией тщательно моют, сушат завёртывают в бумагу для сохранения стерильности после прогревания.

Стерилизация питательных сред

Стерилизация насыщенным паром под давлением

(автоклавирование)

Это наиболее надёжный и чаще всего применяемый способ стерилизации питательных сред. Он основан на прогревании субстрата насыщенным водяным паром при давлении выше атмосферного. С повышением давления пара возрастает его температура. Совместное действие высокой температуры и пара обеспечивает надёжность стерилизации: при автоклавировании погибают и вегетативные клетки и споры микроорганизмов.

Автоклавирование проводят при различных режимах. Когда указывают режим стерилизации в единицах давления: 0,05; 0,1; 0,2 Мпа - имеют ввиду дополнительное давление. Условия повышенного давления пара создают в специальных герметически закрывающихся толстенных аппаратах - автоклава.