Лабораторна робота № 29 Кількісне визначення вітаміну d

Потрібно знати:

1) функції вітаміну D в організмі людини та ергостерину в рослинах;

2) добову потребу у вітаміні D та його поширення в природі;

3) наслідки надлишку та нестачі вітаміну D в організмі;

4) які активні метаболіти утворюються з холекальциферолу в організмі і яким шляхом.

Потрібно вміти:

1) написати структурні формули вітамінів D₁, D₂ і D₃; реакції перетворення ергостерину в ергокальциферол та 7-дегідрохолестерину – в холекальциферол за дії ультрафіоле­тового світла.

Вітамін D (кальциферол, антирахічний вітамін) існує у вигляді декількох сполук, які розрізняються за будовою та хімічною активністю. Для людини та тварин активними є вітаміни D₂ та D₃ – ергокальциферол та холекальциферол відповідно. В природних продуктах містяться провітаміни цих вітамінів – ергостерин та холестерин.

Нестача вітаміну D в раціоні дітей призводить до виникнення рахіту, в основі розвитку якого лежать порушення фосфорно-кальцієвого обміну та відкладання в кістковій тканині фосфату кальцію. При цьому кістки стають м’якими і під вагою тіла набувають потворних форм.

Найбільше вітаміну D₃ міститься в продуктах тваринного походження: вершковому маслі, жовтку яєць, печінці та в жирах, зокрема, в риб’ячому жирі. З рослинних продуктів найбільше найбільш багаті на вітамін D₂ рослинні олії (соняшникова, оливкове), дріжджі.

Ергостерин Ергокальциферол

Вітамін D визначають за допомогою кольорової реакції з трихлористим стибієм. Інтенсивність утвореного жовтувато-рожевого забарвлення пропорційна концентрації вітаміну D і визначається за допомогою ФЕКа при довжині хвилі 500 нм.

Реактиви.

Хлороформний розчин хлориду стибію (SbCl₃) (розчин приготувати, як описано в роботі № 28); ацетилхлорид, стандартний розчин вітаміну D, хлороформ.

Хід роботи.

Роботу проводити у витяжній шафі!

1) Побудова калібрувального графіка

Для побудови калібрувального графіка в чотири пробірки відміряти по 2,5; 5,0; 7,5; 10,0 мл стандартного розчину вітаміну D і додати хлороформ в об’ємі 7,5; 5,0; 2,5; 0 мл відповідно, щоб загальний об’єм кожного розчину становив 10 мл. З кожної пробірки взяти по 1 мл розчину (в кожному з них міститься від 250 до 1000 МО кальциферолу), обробити їх ацетилхлоридом і трихлористим стибієм і фотометрувати на ФЕК. Побудувати калібрувальний графік: на осі абсцис відкласти концентрацію вітаміну D в міжнародних одиницях, а на осі ординат – величину оптичної густини.

2) Визначення вмісту вітаміну D в досліджуваному розчині

В пробірку внести 1 мл хлороформного розчину спиртового концентрату вітаміну D, додати 3 краплі ацетилхлориду і 6 мл розчину трихлористого стибію. Через 4 хв визначити оптичну густину на ФЕК, використовуючи зелений світлофільтр (500 нм), проти розчину трихлористого стибію. Концентрацію вітаміну D в досліджуваному розчині розрахувати за калібрувальним графіком, де кожному значенню знайденої оптичної густини відповідає певний вміст вітаміну D в 1 мл розчину.

Знаючи оптичну густину досліджуваної проби, знайти за графіком кількість вітаміну D в 1 мл хлороформного розчину спиртового концентрату, а потім, врахову­ючи розведення, кількість вітаміну в спиртовому концентраті.