Лабораторна робота № 28 Кількісне визначення вітаміну а

Потрібно знати:

1) вітаміни, які належать до групи жиророзчинних;

2) функції ретинолу в організмі людини та β-каротину в рослинах;

3) добову потребу у вітаміні А та його поширення в природі;

4) наслідки надлишку та нестачі вітаміну А в організмі.

Потрібно вміти:

1) написати структурні формули вітаміну А та β-каротину; цикл перетворень родопсину.

Вітамін А (ретинол, антиксерофтальмічний вітамін) з хімічної точки зору є циклічним ненасиченим одноатомним спиртом, який складається зі шестичленного кільця (β-іонон), двох залишків ізопрену та первинної спиртової групи. Вітаміни групи А добре розчинні у жирах та розчинниках жирів – бензолі, хлороформі, ефірі, ацетоні тощо. Характерними симптомами нестачі вітаміну А у людини і тварин є гальмування росту, зниження маси тіла, загальне виснаження організму, ороговіння епітелію шкіри, а також слизових оболонок.

Найбільше вітаміну А міститься у свинячій та коров’ячій печінці, яєчному жовтку, молоці, маслі, сметані, вершках. Особливо багато його в жирах печінки морського окуня, тріски, палтуса. Серед рослинних продуктів джерелами вітаміну А є морква, томати, перець, у яких вітамін А знаходиться вигляді провітамінів – каротинів.

Нижче подано формулу β-каротину – найважливішого попередника вітаміну А:

Метод кількісного визначення вітаміну А ґрунтується на його здатності взаємодіяти з трихлористим стибієм (SbCl₃) у присутності оцтового ангідриду, в результаті чого розвивається синє забарвлення. Інтенсивність забарвлення, яка прямо пропорційна кількості вітаміну А в пробі, визначають за допомогою ФЕКа.

Реактиви.

Риб’ячий жир, хлороформ, оцтовий ангідрид, хлороформний розчин хлориду стибію (SbCl₃). Для приготування останнього розчину порошок хлориду стибію (III) промивають хлороформом, доки не почне стікати прозорий безбарвний розчин; промитий реактив висушують в ексикаторі над сірчаною кислотою 1-2 доби. Потім готують насичений розчин хлориду стибію (III), розчиняючи його в хлороформі. На дні склянки повинно бути кілька кришталиків хлориду стибію, який не розчинився.

Хід роботи.

Роботу проводити у витяжній шафі!

1) Побудова калібрувального графіка

Калібрувальний графік будують за допомогою стандартного високоактивного концентрату вітаміну А в риб’ячому жирі. Якщо вміст вітаміну А в 1 мл концентрату становить 500 МО (міжнародні одиниці), то для виготовлення вихідного розчину взяти 10 мл риб’ячого жиру і розчинити в 50 мл хлороформу. В 1 мл цього розчину міститься 100 МО вітаміну А. З цього розчину приготувати ще 5-6 розведень з таким роз­рахунком, щоб у 0,4 мл одержаних розчинів містилось від 20 до 70 МО вітаміну А. До цієї кількості (0,4 мл) стандартних розчинів додати 4 мл розчину трихлористого стибію, і через 10 сек визначити оптичну густину проб при 620 нм проти кювети, наповненої тільки розчином трихлористого стибію. Отримані дані використати для побудови калібрувального графіка: на осі ординат нанести знайдені результати оптичної густини для кожного розведення розчину, а на осі абсцис – вміст вітаміну А в тих же розчинах (в МО).

2) Визначення вмісту вітаміну А

Риб’ячий жир у кількості 2,5 мл розчинити в 25 мл хлороформу в мірній колбі. В одну з кювет ФЕКа помістити 0,4 мл хлороформного розчину риб’ячого жиру, додати 1-2 краплі оцтового ангідриду (для попередження появи каламутності) і 4 мл розчину трихлористого стибію. Через 10 сек фотометрувати, як вказано вище. Вміст вітаміну А в досліджуваному розчині визначити за калібрувальним графіком.

Вміст вітаміну А в 1 мл риб’ячого жиру розрахувати за формулою:

де: х – вміст вітаміну А в 1 мл риб’ячого жиру, МО;

а – кількість вітаміну А в 1 мл досліджуваного розчину (щоб отримати цю величину, необхідно знайдену за графіком кількість вітаміну А в 0,4 мл розчину розділити на 0,4);

g – кількість риб’ячого жиру, мл;

V – загальний об’єм досліджуваного хлороформного розчину риб’ячого жиру, мл.