Лабораторна робота № 26 Окислення вітаміну в1 до тіохрому

Потрібно знати:

1) у яких біохімічних процесах бере участь вітамін В₁ та до складу яких ферментних систем він входить;

2) поширення в природі вітаміну В₁;

3) причини та наслідки авітамінозу, викликаного нестачею тіаміну;

4) добову потребу у вітаміні В₁ та шляхи її забезпечення.

Потрібно вміти:

1) написати структурну формулу тіаміну та тіамінпірофосфату;

2) написати рівняння реакції окислення тіаміну в тіохром.

Вітамін В₁ (аневрин, тіамін) бере участь у реакціях, які каталізують деякі кар­боксилази, декарбоксилази і дегідрогенази (наприклад, піруватдегідрогеназний ком­плекс). При нестачі вітаміну В₁ порушуються окисно-відновні процеси, обмін білків, жирів і вуглеводів.

У кристалічному стані тіамін це тонкі безбарвні голки з температурою плавлення 248–250С, добре розчинні у воді і погано – в етанолі, ефірі, хлороформі та інших органічних розчинниках.

Вітамін В₁ легко руйнується при високій температурі у нейтральному і особливо в лужному середовищі; при рН 3,0–4,5 тіамін стійкий і витримує нагрівання до 120–140С. В природі зустрічається у вільному та зв’язаному станах. Продукти рослинного походження (дріжджі, злаки) багатші на цей вітамін, ніж продукти тваринного походження.

Принцип реакції, яка лежить в основі наведеного методу визначення, полягає у здатності тіаміну в лужному середовищі за наявності K₃[Fe(CN)₆] перетворюватись у тіохром, який флуоресціює в ізобутиловому спирті.

Окислення тіаміну в тіохром можливе і за дії пероксиду водню. Реакція при цьому відбувається наступним чином:

Р еактиви.

5% розчин K₃[Fe(CN)₆], 30% розчин NaOH, ізобутанол, розчин вітаміну В₁ (5 мкг/мл).

Хід роботи.

До 1 мл розчину вітаміну В₁ до­дати 2 мл 5% розчину K₃[Fe(CN)₆] і 1 мл 30% розчину NaOH, добре перемішати і екстрагувати ізобута­нолом. Спостерігати в ультрафіоле­ті інтенсивну синю флуоресценцію ізобутанольного екстракту тіохро­му.

Лабораторна робота № 27 Відновлення рибофлавіну

Потрібно знати:

1) до складу яких життєво важливих сполук входить рибофлавін і яка біологічна роль;

2) біохімічні реакції, у яких беруть участь флавінвмісні сполуки;

3) поширення в природі рибофлавіну;

4) наслідки нестачі рибофлавіну в організмі;

5) добову потребу у вітаміні В₂.

Потрібно вміти:

1) написати структурні формули рибофлавіну, флавінмононуклеотиду (FMN) та флавінаденіндинуклеотиду (FAD);

2) написати рівняння реакції окислення/відновлення рибофлавіну.

Р ибофлавін, або вітамін В₂, є складовою частиною флавінвмісних оксидоредуктаз. Нестача цього вітаміну в організмі людини і тварин призводить до зниження ваги, порушення апетиту, запалення слизової оболонки та інших па-тологічних змін. Рибофлавін є метильованим ізоалоксазином, сполученим з п’ятиатомним спиртом рибітолом.

У природі рибофлавін зустрі­чається у вільній формі, а також у складі флавінаденіндинуклео­тиду та флавінмононуклеотиду, міцно зв’язаних з білками. У чи­стому вигляді – це речовина жо­втого кольору. Вітамін В₂ стійкий у кислому середовищі, а в лужному він руйнується. Багато рибофлавіну в дріжджах, пшениці, картоплі та інших рослинних продуктах.

При відновленні рибофлавіну змінюється забарвлення: від жовтого (рибофлавін) до червоного (родофлавін) і, зрештою, безбарвного (лейкофлавін).

Реактиви.

0 ,025% розчин вітаміну В₂, концентрована соляна кислота, металічний цинк.

Хід роботи.

Налити в пробірку 1 мл розчину рибофлавіну і додати 0,5 мл концен­трованої соляної кислоти і 50 мг ме­талічного цинку. У присутності HCl і Zn рибофлавін перетворюється спочатку в червону сполуку, а потім знебарвлюється.