Лабораторна робота № 24 Кількісне визначення вітаміну р (катехінів) за Левенталем

Потрібно знати:

1) хімічну природу флавоноїдних сполук;

2) поширення біофлавоноїдів;

3) роль флавоноїдів у живих організмах;

4) функціональний зв’язок між вітамінами Р і С;

5) наслідки Р-авітамінозу.

Потрібно вміти:

1) написати структурні формули рутину, катехіну, кверцетину, кемпферолу, дельфіні­дину, цианідину, пеларгонідину тощо;

2) написати рівняння реакцій, на яких ґрунтується визначення вітаміну Р за Левента­лем.

Р-вітамінну активність мають більше десятка рослинних сполук, близьких за структурою, в основі якої знаходиться скелет флавону. Препаратами вітаміну Р є: цитрин (гесперидин) з цитрусових, препарат з листя чайного дерева, рутин з листя гречки.

В основу визначення катехінів покладе­но метод окислення флавоноїдів пер­манганатом калію. Катехіни екстрагу­ють з чаю дистильованою водою. Водні розчини титрують 0,1 н. KMnO₄ у при­сутності індикатора індигокарміну. Ре­зультати титрування порівнюють зі стандартним коефіцієнтом титрування за Левенталем, який дорівнює 6,4, ос­кільки експериментально встановлено, що 1 мл 0,1 н. KMnO₄ окислює 6,4 мкг рутину.

Реактиви.

0,1 н. розчин перманганату калію (KMnO₄), 0,1% розчин індикатору індигокарміну, чай або готовий екстракт.

Хід роботи.

Наважку чаю масою 0,25 г залити нагрітою до кипіння водою об’ємом 100 мл і кип’ятити протягом 5 хв у колбі зі зворотнім холодильником чи лійкою. Отриманий екстракт охолодити, відібрати 2 мл і перенести в іншу колбу, куди налити ще 50 мл дистильованої води і 5 мл розчину індигокарміну. Після доливання індигокарміну вміст колби набуває інтенсивного синього забарвлення.

Ретельно перемішуючи рідину в колбі, вміст титрувати 0,1 н. розчином KMnO₄ до появи жовтого забарвлення через перехідні відтінки – від синього до зеленого і зеленувато-жовтого. Для контролю титрують 52 мл води із внесеним до неї 5 мл розчину індигокарміну.

Різниця між дослідним і контрольним титруванням становить собою кількість мілілітрів 0,1 н. KMnO₄, які йдуть на окислення катехінів.

Для розрахунку результатів аналізу користуються формулою:

де: х – вміст вітаміну Р у препараті, %;

а – кількість 0,1 н. KMnO₄, яка йде на титрування дослідного розчину препарату, мл;

b – кількість 0,1 н. KMnO₄, яка йде на титрування контрольної проби, мл;

6,4 – стандартний розрахунковий коефіцієнт титрування;

V₁ – об’єм, в якому розчинено наважку чаю, мл;

V₂ – об’єм розчину, взятого для титрування, мл;

Р – наважка, мг.

Лабораторна робота № 25 Реакція вітаміну рр з гідросульфітом натрію

Потрібно знати:

1) до складу яких життєво важливих сполук входить нікотинова кислота і яку функцію вони виконують;

2) біохімічні реакції, в яких беруть участь сполуки, що містять нікотинову кислоту;

3) продукти, в яких міститься нікотинова кислота, та наслідки її нестачі в організмі;

4) добову потребу у вітаміні РР.

Потрібно вміти:

1) написати структурні формули нікотинової кислоти, нікотинаміду, відновлені та окислені форми нікотинамідаденіндинуклеотиду (NAD) та нікотинамідаденін­динуклеотидфосфату (NADP);

2) написати рівняння реакцій окислення та відновлення NAD.

В організмі нікотинова кислота, або вітамін РР, перебуває у вигляді аміду. Відсут­ність або нестача нікотинової кислоти в їжі викликає захворювання на пелагру (ураження нервової системи, шлунково-кишкового тракту і шкіри). Амід нікотинової кислоти є складовою частиною нікотинамід­аденіндинуклеотиду (NAD⁺) та нікотинамід­аденіндинуклеотидфосфату (NADP⁺) – важли­вих коферментів та простетичних груп оксидо­редуктаз.

Принцип реакції полягає у здатності гідросульфіту натрію відновлювати нікотинову кислоту з утворенням сполуки жовтого кольору.

Реактиви.

10% розчин бікарбонату натрію, 5% розчин гідросульфіту натрію, препарат вітаміну РР.

Хід роботи.

У пробірку помістити 5–10 мг вітаміну РР і додати 1,5 мл 10% розчину бікарбонату натрію, перемішати і додати 1,5 мл свіжоприготованого 5% розчину гідросульфіту натрію. Спостерігати появу жовтого кольору.