Лабораторная работа № 1. Ферменты слюны

Цель: изучить химический состав слюны человека.

Приборы, материалы: водяная баня, термометр, штатив с пробирками, пипетки, стеклянные трубки для забора слюны, маленькая воронка уксусная кислота, дистиллированная вода, секундомер, вискозиметр, индикаторная и фильтровальная бумага, 1%-ный раствор сырого крахмала, 1%-ный крахмальный клейстер, 10%-ный раствор едкого натра, 5%ный раствор сульфата меди, реактив Люголя, 0,5%-ный раствор соляной кислоты, колотый лед. Объект исследования – человек.

Ход работы

В слюне имеются ферменты: амилаза и мальтаза, действующие на углеводы (крахмал). Для изучения ферментативного действия слюны пригодна только слюна человека.

1. Расщепление крахмала слюной

В три пробирки наливают по 6,0 мл вареного 1%-го крахмала. В 1-ую пробирку добавляют 1,0 мл дистиллированной воды, во 2-ую пробирку – 1,0 мл слюны, в 3-ю – 1,0 мл слюны, предварительно хорошо прокипяченной. Все пробирки ставят на 5-10 минут в водяную баню с температурой 37-38° или держат (но более длительное время) зажатыми в руке. Затем, разделив содержимое каждой пробирки на две равные части, производят качественные пробы: на крахмал и на сахар.

1) Реакция на крахмал. Из каждой пробирки (1-й, 2-й, 3-й) отливают половину содержимого и прибавляют к нему одну-две капли жидкого йодного раствора. Реакция получается нагляднее с растворами, содержащими небольшое количество йода. Для этого 10%-ный спиртовой раствор йода разводят в 10-20 раз водой. Синее окрашивание, указывающее на наличие крахмала в содержимом, имеется только в 1-й и 3-й пробирках. Кипячение слюны разрушило фермент. Во 2-й пробирке содержимое стало прозрачным и цветовая реакция с йодом отсутствует, так как крахмал превратился в сахар.

2) Реакции на сахар, реакция на сахар с реактивом Фелинга. Перед определением смешивают в равных частях I и II раствор реактива Фелинга.

В пробирки со второй половиной содержимого прибавляют по 1,0 мл свежеприготовленного реактива Фелинга и нагревают до кипения. Во второй пробирке (в которой содержимое стало прозрачным) происходит изменение окраски – синий цвет (цвет медного купороса) переходит постепенно в бурый, затем красноватый, что указывает на выпадение закиси меди в присутствии сахара. В пробирках 1-й и 3-й окраска не изменяется, так как в них не произошло переваривания крахмала и сахар отсутствует.

3) Проба Троммера на сахар. Для обнаружения сахара можно произвести и пробу Троммера. Для этого в каждую пробирку наливают 3,0 мл 10%-ного NaOH и 1-3 мл 1%-ного CuSO4; при нагревании только в той пробирке, где крахмал перешел в сахар (вторая пробирка), появляется бурое окрашивание (появление закиси меди в присутствии сахара).

Действие слюны на вареный крахмал зависит от находящегося в ней фермента – птиалина, который под влиянием кипячения разрушается.

2. Действие слюны на сырой крахмал

В одну пробирку наливают 5,0 мл 1%-ного вареного крахмала (клейстера), во вторую 5,0 мл 1%-ного сырого крахмала и добавляют в обе пробирки по 1,0 мл слюны человека; ставят обе пробирки в водяную баню при температуре 37-38°. Через 5-10 минут, разделив содержимое обеих пробирок пополам, производят в одной паре пробирок реакции на присутствие крахмала (с йодом) и в другой паре на присутствие сахара (проба Троммера или реакция с реактивом Фелинга).

Сахар обнаруживается только в той пробирке, где был вареный крахмал (клейстер).

Фермент слюны птиалин действует преимущественно на вареный крахмал, превращая его в сахар.