1. Подсчет эритроцитов.

Берут заполненный меланжер для эритроцитов и, зажав концы его III и I пальцами, в течение 1 мин встряхивают его. Тотчас после тщательного перемешивания крови, выпустив предварительно наружу 1-2 капли, наносят небольшую капельку на сетку камеры, предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стеклышком. Излишек раствора при этом стекает в желобки. Если капля слишком велика, то жидкость может попасть на боковые пластинки камеры и высота слоя будет больше 0,1 мм. В этом случае камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть марлей и заполнить снова. Разведенную кровь следует еще раз перемешать.

Заполнив камеру, ставят ее под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчету.

Считать эритроциты удобнее при большом увеличении (окуляр × 7, объектив × 40).

Чтобы получить удовлетворительные данные, необходимо подсчитать число эритроцитов в 5 больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например по диагонали. Рекомендуется вначале на листе бумаги нарисовать пять больших квадратов, разделить их на 16 маленьких и в каждый маленький квадратик вписать найденное число эритроцитов. Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границах между малыми квадратиками, руководствуются правилом Егорова: «Относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе в данном квадратике, не обсчитываются». Подсчитав таким образом число эритроцитов (А) в 5 больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадратике А/80. Зная, что объем части камеры над одним маленьким квадратиком равен 1/4000 мм³, умножают найденное число на 4000. Получается число эритроцитов в 1 мкл разведенной крови. Умножив на разведение – 200, получают количество эритроцитов в 1 мкл цельной крови. Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

где X – искомое число эритроцитов, А – число эритро­цитов в 80 маленьких квадратиках.

2. Подсчет лейкоцитов.

Берут заполненный меланжер для лейкоцитов и, перемешав его содержимое так же, как это рекомендовалось при подсчете эритроцитов, заполняют счетную камеру. Для получения точных результатов подсчет производят в 25 больших квадратах, что составляет 400 маленьких квадратиков. Лейкоциты удобнее считать при малом увеличении (окуляр ×15, объектив ×20).

Формула для вычисления количества лейкоцитов в 1 мкл крови:

где X – искомое число лейкоцитов в 1 мкл крови; В – число лейкоцитов в 25 больших (400 маленьких) квад­ратах.

3. Подсчет тромбоцитов по способу Джавадяна.

Тромбоциты играют большую роль в процессе свертывания крови, так как в них содержится профермент – протромбокиназа. В норме в 1 мкл крови содержится 200 000-300 000 тромбоцитов.

Для приготовления раствора на 100 мл дистиллированной воды берут 3,8 г цитрата натрия, 0,57 г хлорида натрия, 0,15 г метиленовой сини. Раствор кипятят, охлаж­дают, фильтруют, затем в него добавляют 2-3 капли крепкого формалина.

Прокалывают скарификатором палец и набирают в меланжер для эритроцитов кровь до метки 0,5. Тотчас разбавляют ее раствором до метки 101 (в 200 раз). Тщательно перемешивают, встряхивая меланжер, концы у которого при этом зажимают I и III пальцами правой руки. Откладывают меланжер на 10-15 мин для того, чтобы тромбоциты окрасились метиленовой синью.

После повторного перемешивания выпускают 2-3 кап­ли раствора на ватку и одну каплю в счетную камеру под покровное стекло.

Подсчет тромбоцитов ведется под большим увеличением. При правильном соблюдении всех условий тромбоциты распределяются в камере равномерно между эритроцитами и имеют вид голубоватых глыбок. Подсчитывают их число в 25 больших квадратах и вычисляют количество тромбоцитов в 1 мм³ крови по формуле:

где С – число тромбоцитов в 25 больших квадратах, со­ставляющих 400 маленьких квадратиков.