Тема 5. Физиология системы крови Лабораторная работа № 1. Подсчет форменных элементов крови в камере Горяева

К ровь состоит из жидкой части – плазмы и взвешенных в ней форменных элементов: эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Форменные элементы составляют около 45% объема крови, остальные 55% приходятся на долю плазмы. Количество форменных элементов принято выражать их числом в 1 мкл крови.

В крови содержится в среднем эритроцитов 4,5-5·10¹²/л (4 500 000-5000000 в 1 мкл), лейкоцитов 4-9·10⁹/л (4000-9000 в 1 мкл), тромбоцитов 300- 10⁹/л (300 000 в 1 мкл).

Для подсчета форменных элементов кровь, взятую из пальца, разбавляют в специальных смесителях (меланжерах), чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета (рис. 24). Заполняют разбавленной кровью счетную камеру (рис. 25) и подсчитывают под микроскопом число форменных элементов.

Зная объем камеры и разбавление крови, вычисляют число кровяных телец в 1 мкл цельной крови.

Меланжер представляет собой пипетку с ампулообразным расширением. В ампуле находится стеклянная бусинка для лучшего размешивания крови. На капилляре нанесены две метки: 0,5 и 1; третья метка стоит за ампулообразным расширением: на меланжере для эритроцитов и тромбоцитов – 101, для лейкоцитов – 11. Последние метки указывают, во сколько раз объем ампулы больше объема капилляра. Для разбавления крови для подсчета эритроцитов применяют 3% гипертонический раствор хлорида натрия, в котором эритроциты сморщиваются; для подсчета лейкоцитов применяют 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовой синью. Кислота разрушает оболочки форменных элементов, а краска окрашивает ядра белых клеток. При этом эритроциты становятся невидимыми и не мешают подсчету лейкоцитов.

Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого имеются 4 желобка. Между ними образуются 3 узкие пластинки. Средняя пластинка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от желобка расположены сетки.

Так как высота боковых пластинок на 0,1 мм больше средней, то при наложении на них покровного стекла над сеткой образуется камера глубиной в 0,1 мм.

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15×15). Каждый третий квадрат разделен дополнительно поперечными и продольными линиями на 16 маленьких квадратиков. Таких больших квадратов, разделенных на маленькие, в сетке 25. Сторона маленького квадратика равняется 1/20 мм, площадь 1/20×1/20=1/400 мм², так называемый «объем малого квадратика» равен 1/400×1/10=1/4000 мм³.

Рис. 25. Счетная камера Горяева.

Цель работы: освоить методику подсчета форменных элементов крови.

Приборы и материалы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжеры для красных и белых кровяных телец, скарификатор, 2 чашечки для разбавляющих жидкостей, вата, 3% раствор хлорида натрия, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовой синью, спирт, йод, эфир. Работу проводят на человеке.

Ход работы.

1. Перед началом работы необходимо разобраться в устройстве сетки счетной камеры. Для этого помещают камеру под микроскоп и сначала под малым, а затем под большим увеличением рассматривают сетку, находят малые квадратики и большие квадраты (см. рис. 24).

2. В специальные чашечки наливают растворы для разбавления крови: для эритроцитов – 3% раствор хлорида натрия и для лейкоцитов – 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовой синью.

3. Кровь набирают в меланжеры.

Кровь берут из IV пальца левой руки. Первую выступившую каплю стирают ватным тампоном. Во вторую каплю крови погружают кончик меланжера для эритроцитов, который при этом держат горизонтально, и набирают кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Быстро, пока кровь не свернулась, переносят кончик меланжера в 3% раствор хлорида натрия и набирают его до метки 101, т. е. разводят кровь в 200 раз. После этого смеситель переводят опять в горизонтальное положение и кладут на стол. Тем же способом набирают кровь в меланжер для лейкоцитов до метки 0,5 и уксусную кислоту до метки 11, т. е. разводят кровь в 20 раз.