Лабораторна робота № 9 Визначення активності антибіотиків та фітонцидів

9.1 Мета: вивчити чутливість мікроорганізмів до антибіотиків та фітонцидів методом дисків.

9.2 Короткі теоретичні відомості

Багато мікроорганізмів у процесі життєдіяльності виробляють біологічно активні речовини, які згубно діють на мікроби-антагоністи. Ці речовини називаються антибіотики. Від інших антимікробних речовин вони відрізняються вибірковістю дії, тобто пригнічують життєдіяльність і вбивають певні антагоністичні види мікроорганізмів.

Антагонізмом називаються такі взаємо­відносини між мікроорганізмами, або між мікроорганізмами і біологічно активними речовинами, коли один вид їх не може розвиватися за присутності іншого виду мікроорганізмів, або за присутності певних біологічно активних речовин. Вперше це явище було відкрито Л. Пастером при культивуванні бацил сибірки і гнильних бактерій у 1877 p., а де­тально вивчено І. І. Мечниковим.

Антибіотики відрізняються за хімічною будовою та антимікробною дією. Одні з них лише пригнічують розвиток мікроорганізмів, інші призводять до їх загибелі.

Ознакою антибактеріальної активності речовини є утворення зони затримки росту на середовищі навколо диска, просоченого антибіотиком (метод дисків): при встановленні дисків на середовище антибіотик розчиняється вологою середовища і дифундує в навколишнє середовище. Залежно від активності антибіотиків спостерігається різна площа затримки росту мікроорганізмів. На одній чашці Петрі мо­жна одночасно визначати цим методом чутливість бактерій до бага­тьох антибіотиків.

9.3 Експериментальна частина

Матеріали та обладнання: термостат; чашки Петрі; спиртівки; бактеріологічні петлі; філь­трувальний папір; МПА; анти­біотики: пеніцилін, стрептоміцин, біоміцин (або інші); фітонциди: ци­буля і часник; чисті культури бактерій.

Чашки Петрі із застиглим МПА кладуть на стіл кришкою догори. Дотримуючись правил стерильності, наносять піпеткою на поверхню середовища краплю суспензії чистої культури, яка буде слугувати за тест-організм, і ретельно розтирають її по всій поверхні середовища за допомогою стерильного шпателя. На поверхню засіяного МПА обпаленим над спиртівкою пінцетом накладають 4-5 дисків (кру­жечків фільтрувального паперу діаметром до 10 мм), просочених різ­ними антибіотиками (пеніциліном, стрептоміцином, біоміцином або іншими) та фітонцидами – ци­булею і часником. Диски розташовують по колу чашки так, як показано на малюнку. Чашки позначають і ставлять у термостат при температурі 37 °С на 2-3 доби.

А нтибіотики з дисків дифундують у поживне середовище, і нав­коло дисків виникають зони пригнічення росту бактерій (рисунок 9.1).

1 – кружечки фільтрувального паперу просочені певними дозами антибіотиків;

2 – зони пригнічення бактерій

Рисунок 9.1 – Визначення чутливості бактерій до різних антибіотиків.

Визначають зону пригнічення росту бактерій. Величина зони пригнічення росту визначає ступінь чутливості бактерій до того чи іншого антибіотика. Зона діаметром до 12-15 мм свідчить про малу чутливість, а більше 22-25 мм – про високу чутливість мікроорганізму до дано­го антибіотика.

Результати дослідів записують за такою формою:

Таблиця 9.1 – Результати дослідження антимікробної дії

деяких антибіотиків та фітонцидів

Вид бактерій	Величина зони затримки росту бактерій, мм					Висновок про ступінь чутливості
	Пеніцилін	Біоміцин	Стрептоміцин	Цибуля	Часник

9.4 Висновок: Серед досліджених речовин антимікробною дією по відношенню до бактерій виду… володіють такі речовини…. Найкращу антибіотичну дію проявив… Серед фітонцидів більш ефективним для бактерій виду….є….

Контрольні питання

1. Які біологічно активні речовини називають антибіотиками?

2. В чому полягає відмінність дії антибіотиків на мікроорганізми від інших антимікробних речовин?

3. В чому полягає метод визначення антимікробної активності за допомогою дисків?

4. Що значить вираз «антибіотики вбивають певні антагоністичні види мікроорганізмів»?

5. Чи однаковий характер дії різних антибіотиків?