8.3 Експериментальна частина.

Матеріали та обладнання: приготувати для заняття молоко пастеризоване (розфасовані продукти для аналізу мають бути представлені в оригінальній упаковці), сире молоко (відбирається в стерильний посуд), стерильний посуд (колби 100-200 см³); поживне середовище МПА; термостат; чашки Петрі; спиртівки; піпетки на 1 см³) ; розчин для приготування розбавлення.

Визначення КМАФАнМ

8.3.1 Узяти проби молочних продуктів

2. Зробити посів на КМАФАнМ.

Кількість продукту, що засівається, встановлюється з ура­хуванням найбільш ймовірного мікробного обнасінення (таблиця 8.1).

Таблиця 8.1 – Об'єми продукту для посіву при визначенні КМАФАнМ

Найменування продукту	Об'єм, що засівається, см3
Молоко і вершки сирі Молоко і вершки пастеризовані	0,0001 0,1	0,00001 0,01	0,000001 0,001

Із кожної проби роблять посів у дві-три чашки з розбавлень, зазначених у таблиці 8.1.

Приготування розбавлень

Розбавлення роблять у стериль­ній водопровідній воді або стерильному 0,5%-му водному роз­чині NaCl. У процесі одного досліду користуються постійним коефіцієнтом розбавлення, найчастіше – десятковим. Для цьо­го стерильну воду розлити стерильною піпеткою по 9 см³ у сте­рильні сухі пробірки, потім перенести стерильною піпеткою 1 см³ досліджуваного матеріалу в пробірку з 9 см³ стерильної водопровідної води. Отримаємо розбавлення 1:10 (рисунок 8.1) (якщо досліджуваний зразок уже розбавили в 10 разів (10 г наважки внесли в колбочку з 90 см³ стерильної води), то одержують розбавлення 1:100). Суспензію одержаного розбавлення ретельно перемішують за допомогою стерильної пі­петки, вбираючи в піпетку і випускаючи з неї отриману завись. Цю процедуру повторити 3-5 разів, що дає можливість перемі­шувати суспензію і зменшити адсорбцію клітин на її стінках. Потім цією самою піпеткою 1 см³ одержаного розбавлення пе­ренести у другу пробірку (це розбавлення 1:10²), з другої – в третю (1:10³ ) і т.д.

Рисунок 8.1 – Схема приготування розбавлень мікроорганізмів і посіву

Кожне з розбавлень має бути засіяне в кількості 1 см³ у одну чашку Петрі і залите поживним середови­щем, що використовується для визначення КМАФАнМ у моло­ці і молочних продуктах, розплавленим й охолодженим до 40-45 °С. Після заливання агаризованого середовища вміст чашки Петрі ретельно перемішують легким обертальним погойдуван­ням для рівномірного розподілу посіяного матеріалу. Після за­стигання агару чашки Петрі перевертають кришками донизу і ставлять у термостат з температурою 30 °С на 72 год.

8.3.3 На наступному занятті проаналізувати посіви. Підрахувати всі результати. Отримані результати занести в таблиці. Ре­зультати порівняти з нормативними показниками за ДСТУ.

Кількість вирослих колоній підраховують на кожній чашці. Загальну кількість бактерій, виражену у колонієутворюючих одиницях (КУО) в 1 см³ досліджуваної проби, обчислюють за формулою:

де С – сума колоній, підрахована на чашках Петрі; п₁ – кіль­кість чашок з першим розведенням; n₂ – кількість чашок з дру­гим розведенням; d – коефіцієнт найнижчого розведення.

Результат підрахунку виражають двома значущими цифра­ми. Якщо цифрою, яку округлюють, є п'ять, то парну цифру, що стоїть зліва, залишають такою самою (34,5  34), а непарну – округлюють до парної (33,5  34).

Приклад.

Розведення 10^–2 : 278 та 290 колоній;

розведення 10^–3: 33 та 28 колоній.

Результати заносять у таблицю 8.2.

Таблиця 8.2. Кількість мезофільних аеробних і факультативно-анаеробних мікроорганізмів у молоці та молочних продуктах

Найменування продукту	Норматив, КУО/см3	Результати, КУО/см3	Висновок
Молоко гатунку: екстра вищого першого Молоко пастеризоване: у пляшках і в пакетах у флягах і у цистернах	<1106 <3106 <5106 1105 2105

8.4 Висновок: КМАФАнМ у дослідженій пробі сирого молока складає…., норматив – …; пастеризованого молока –…, норматив – …. Досліджене молоко за КМАФАнМ…. до вжитку.

Контрольні питання

1. Як відбирають пробу продукції для мікробіологічного аналізу?

2. Як готують розведення твердих та рідких продуктів для посіву?

3. На які продукти поширюється визначення КМАФАнМ?

4. На чому заснований метод визначення КМАФАнМ?

5. Які особливості свіжовидоєного молока?

6. Як і звідки потрапляють мікроорганізми в молоко?

7. Що таке спонтанна мікрофлора молока?

8. Як змінюється мікрофлора молока у процесі зберігання?

9. Які мікробіологічні показники і чому потрібно визначати у молоці?

10. Що дає змогу оцінити визначення КМАФАнМ у молоці?