34. Трансформация бактерий. Исследования ф. Гриффитса.

Это превращение одного штамма в др(наприм:непотоген в патоген).При трансформации кл донора и реципиента не контакт-т др с др-м.Трансформацию открыл бактериолог Грифитс 1928,работая с пневмококком диплококкус пнеумония.У пневмококков есть 2 вида штаммов,кот различ-я по хар-ру роста на пит среде и потогенности.те нек штаммы эти вызывают восполение а некот нет.Оказалось,что бакт потоген штаммов синтез-т полисахаридную капсулу,слиз. Повер-ь кот защищ-т бакт-ю кл-у от иммунной сист-ы хозяина.Патог-е штаммы обознач S.Мыши,кот-м вводили живые кл S-штама погибли.По антигенным свойствам капсулы различают неск типов S-форм:IS,IIS,IIISи тд.Другая форма пневмококка R-форма(штамм),не имеющая защитной капсулы,образует шероховатые колонии и непотогенна для мышей. R-форма(штамм) иногда даёт обратные мутации.IS-> <-IR ,IIS-> <- IIR,IIIS -> <-IIIR.при обратной мц штамм образует только такую капсулу,кот была у родит-й особи.В1928 Гриффетс обнаружил,что если мышам ввести убитые нагреванием до 55 градусов кл штамма IIIS и одноврем.живые кл формы IIR,то мыши погибнут от инфекции,которая как показало вскрытие,вызывается кл-и типа IIIS.Сделал вывод: живые непатог Rкл-и могут трансформироваться в патогенные убитыми кл-ми штамма IIIS.Гриффитс пришел к выводу ,что из мертвых S кл-к высвобождается какой-то фактор кот-й придает Rкл-ам способность образовывать капсулу и придохраняет их от иммунной системы хозяина .Оказалось,что такая трансформация наследуется.Мол-лы наследств-ти в то вр еще не были известны,хотя предпологали,что это Б.Поэтому много усилий было потрачено на то, что бы установить этот трансформационный фактор.

35. ДНК – трансформирующий фактор пневмококка. Опыты О. Эвери.

В дальнейшем др исследователи показали,что такое же превращение непатоген штаммов в патогенные могут происходить in vitro.Это было сделано так: известно,что возникшие трансформированные кл можно легко отделить от нерансформированых,т к они не агглютинируются сывороткой,содержащие антитела против IIR.Агглютинирование кл IIR опускаются хлопьями на дно пробирки.Тогда как IIIS свободно размножаются и образуют мутную суспензию кл IIIS.Используя этот подход Эвери,Мак-Карти и Мак-Леод в 1944 определили,что фактором,приводящим приводящим к трансформации непатогенных кл бакт в патогенные,явл ДНК.ДНК выдел-ая из кл IIIS и добавленная в культуру кл IIR трансформировала часть кл-к IIR в форму IIIS и они преобрели способность передовать эти св-ва при дальнейшем размножении.Добавление ДНКазы-фермент,разрушающего ДНК-препятствовало трансформации.Т обр было получено первое прямое док-во генетт роли ДНК у бакт.В дальн. В исследоваих было показано,что фрагменты ДНК в том числе ген,ответственный зи синтез полисахаридной капсулы,из убитых высокой температурой штаммов,попадают в Rклетки и посредствам рекомбинации включается в их ДНК.

Механизм трансформации:В наст вр проблема трансформации решена.Известно,что трансф-я бакт-это перенос ДНК,изолированной из одних кл в др.Т е при трансформации ДНК, выделенную из кл штамма донора,поглащают кл другого штамма-реципиенты.Об этом можно судить по изменению фенотипа реципиента.Для того что бы ДНК донора проникла в бакт кл,они должны нах-ся состоянии компетентности.Возникновению компетентности,кот преобретается лишь частью кл культуры,спос-т особый белок.Сначала ДНК связывается с пов-тью компет-ых кл,затем эта ДНК ращипляется до небольших фрагментов,кот и поподают в кл. После попадания в бактт 2-цепочечная ДНК превращ-я в одноцепочечную.Одна нить ДНК деградирует,а др – интегрируется с ДНК кл реципиента.Весь процесс трансформации завершается за 10-15 мин.Частота трансформации примерно 1%.Для некот бакт показана трансформация в естественных условиях, т е трансформация – естественный биол-й процесс.В последние годы в связи с развитием ГИ широко применяется плазмидная\векторная трансформация,кот заключается в ведении в кл бактерии\ кл эукар генов, интегрированных в плазмиды.