31.Диагностические иммунные сыворотки .Методы их получения. Тест-системы.

Сыворотка – жид-я часть крови, лишен-я фибриногена.

Диагн-ие сыв-ки испол-ся для идентиф-ии патог-ых микр-ов.Сыв-ки имм-ые диагн-ие (диагностические антисыворотки) – иммун-ые с-ки, содержащие Ат против одного (моновалентные, моноспецифические) или нескольких (поливалентные, полиспецифические) Аг.Получ-т путем иммун-ии живот-х (кроликов и др.) извест-ми полноц-ми Аг. Технол-ия изгот-ия завис от типа с-к (агглютин-щие,прецип-щие,иммунофлюор-ные и др.) и вида Аг.По достижении необход титра жив-х обескровливают, получают с-ку, в случае необход-ти адсорб-т групп-ые Ат, опред-т титр, стерил-т, контрол-т.Лучше польз-ся С.и.д., изготов-ми произв-ым путем и прошедшими государственный контроль. С.и.д. применяют для идентификации возбудителей, как тест-с-ки в серол. реакциях, для установления групп крови и т. д. Хранят в темном месте при +4 -+6°С.

Моноклональные антитела — это иммуног-ны, синтез-ые одним клоном клеток. Монокл-ое АТ связ-ся только с одной антигенной детерминантой на молекуле антигена.Гибридомная технология — слияние с помощью полиэтиленгли-коля лимфоцитов селезенки предварительно иммунизированных организмов определенным антигеном с миеломными (раковыми) клетками, способными к бесконечной пролиферации (делению).Процедура получения гибридомных клеток и моноклональных антител сводится к следующему. Животное (чаще мышь) иммунизируют нужным антигенным материалом. После того как началась продукция антител, удаляют селезенку, и из нее извлекают клетки, среди которых имеются антителообразующие В-лимфоциты. Все клетки смешивают со специально отобранными клетками культуры В-миеломы, дефектными по ферменту метаболизирующему гипок-сантин. К смеси клеток добавляют вещество, повреждающее оболочки клеток и способствующее их слиянию между собой (полиэтилен-гликоль, лизолецитин или вирус Сендай). В результате образуются разнообразные гибридные клетки, а часть клеток остается негибридизированной. Для того чтобы выделить только гибридные клетки, полученную смесь культивируют на специальной среде ГАТ (содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин), в которой не могут жить родительские клетки. В среде остаются живыми только гибридные клетки, но с разными свойствами, так как в селезенке иммунизированного животного наряду с антителообразующими клетками, которые было необходимо получить, содержится много других лимфоцитов. Поэтому следующим этапом является отбор гибридных клеток, способных продуцировать необходимые антитела. Для этого взвесь полученных клеток разбавляют питательной средой и помещают в лунки специальных панелей так, чтобы в каждую лунку попало по одной клетке. Через определенное время определяют антитела, образовавшиеся в каждой лунке, и находят те клетки, которые можно использовать как родоначальников клона гибридомных клеток. Отобранные гибридомные клетки можно культивировать in vitro или in vivo, получая необходимые количества клеток и моноклональных антител. Гибридомные клетки могут храниться в замороженном состоянии, пересылаться из лаборатории в лабораторию. В ходе приготовления гибридомных клеток может быть выделено несколько клонов клеток, продуцирующих антитела к разным эпитопам антигена, что позволяет провести его разносторонний анализ. Моноклональные антитела могут использоваться для разных практических целей: для идентификации клеток - выявления Т- и В-лимфоцитов и других клеток, определения их свойств; для осуществления современных радиоиммунных, иммуноферментных и иммунолюминесцентных методов выявления антигенов и антител; для определения локализации антигенов в организме и доставки к ним (например, в опухоль) лекарственных веществ, присоед-х к антителам; для пригот-ия иммуносорбентов, позвол-х выд-ть или удалить из орган-ма АГ или кл-ки данной специф-ти.