Микробиологическая диагностика гонококковой инфекции

(подробнее см. в теме ЗППП)

Neisseria gonorrhoeae является возбудителем гонореи и бленнореи, лишь в редких случаях, вызывает воспаление слизистых глотки и прямой кишки.

Гонококки представляют собой диплококки размером 1,2 х 0,8 мкм, состоящие из двух бобовидных кокков, располагающихся вогнутыми сторонами друг к другу. Спор не образуют, имеют нежную капсулу, жгутиков не имеют, грамотрицательны.

Гонококки - факультативные анаэробы, на простых питательных средах не растут. Оптимальная температура роста 35-36°С. Биохимические свойства гонококков выражены слабо: ферментируют глюкозу с образованием кислоты, обладают цитохромоксидазной активностью.

Материал для исследования. У мужчин - отделяемое из уретры, сок предстательной железы, сперма, осадок мочи. У женщин - отделяемое влагалища, шейки матки, моча. В необходимых случаях берут соскобы со слизистых других возможных очагов поражения (прямой кишки, глотки, конъюнктивы глаз). Материал отбирают стерильной петлей,

ватным тампоном или ложечкой не ранее чем через 2 часа после последнего мочеиспускания или спринцевания и доставляют в лабораторию максимально быстро во избежание аутолиза гонококков.

Бактериоскопическое исследование. Готовят два мазка из исследуемого материала, фиксируя их 96% спиртом в течение 3 минут. Один из мазков окрашивают метиленовым синим, другой - по Граму, При положительных результатах в мазках обнаруживают грамотрицательные диплококки бобовидной формы, находящиеся внутри лейкоцитов. Положительный бактериоскопический диагноз ставится с основном при острой форме гонореи до начала антибиотикотерапии. При хронической форме заболевания гонококки либо вовсе не обнаруживаются в мазках, либо имеют атипичную форму (в виде шаров или очень мелких образований).

Бактериологическое исследование. Метод является обязательным при диагностике хронической гонореи, а также для контроля по окончании лечения больных гонореей, при диагностике заболевания у детей, по требованию судебно-медицинской экспертизы.

Среды готовят на основе МПА из мяса кроликов или свежих бычьих сердец с добавлением сыворотки крови, дрожжевого гидролизата, казеина. Материал инкубируют при 37°С в течение 24-72 часов в атмосфере, содержащей 10-20% углекислого газа.

Гонококки растут в виде круглых прозрачных колоний, напоминающих капли росы. При идентификации гонококков проводится определение биохимической активности. В завершении исследования обязательно определяют чувствительность культуры к антибиотикам.

Иммунологические исследования. Самостоятельного значения не имеют. При хронической гонореи и в сомнительных случаях ставят РСК (реакция Борде-Жангу) с сывороткой крови больного. В качестве антигена используют взвесь гонококков, убитых формалином. В настоящее время применяется иммунофлюоресцентное исследование, ИФА.

Генодиагностика - (ПЦР).

Принцип метода заключается в естественной репликации ДНК, включающей тепловую денатурацию нуклеиновой кислоты (плавле­ние), ее отжиг с синтетическими олигонуклеотидными праймерами и удлинение цепи (элонгация). Смена этих этапов происходит в ре­зультате простого изменения температуры реакционной смеси. Ме­тод ПЦР обеспечивает многократное приумножение (амплификацию, amplification - усиление, увеличение) в условиях in vitro фрагментов генома и быстрое накопление практически в любых количествах оп­ределенной, интересующей исследователя последовательности ДНК, которая первоначально может быть представлена всего лишь одной молекулой. В результате получают количество материала, достаточ­ное для проведения анализа обычными методами детекции (рис. 12).

Сущность метода ПЦР составляет многократный циклический процесс, попеременно включающий полимеразную реакцию и дена­турацию синтезированного фрагмента двунитевой ДНК и отжиг праймеров, что, в конечном счете, может привести к неограниченно­му увеличению исходного материала.