Бактериологическое обследование на выявление носителей патогенного стафилококка

Основным источником стафилококковой инфекции в лечебно-профилактическом учреждении является человек (больной или здоровый бактерионоситель) из числа:

• больных острыми и хроническими гнойно-септическими процессами;

• медицинского и обслуживающего персонала (с локализацией возбудителя на слизистых оболочках носа, зева, на коже и раневой поверхности).

При проведении плановых бактериологических обследований обязательным является исследование слизи из передних отделов носа. Исследование слизи зева может проводиться выборочно. Забор материала проводит старшая медсестра ЛПУ.

Микробиологическая диагностика стрептококковой инфекции

Стрептококки представлены 29 видами, которые являются представителями нормальной микрофлоры тела человека и животных, а также вызывают заболевания в различных клинических проявлениях.

В зависимости от локализации патологического процесса материалом для исследования служат раневое отделяемое, мокрота, кровь, ликвор, слизь из зева, кусочки пораженных тканей и т.д. Для забора материала используют стерильные пробирки. Одноразовые шприцы, стерильные ватные тампоны. При тонзиллитах и фарингитах пробы для исследования забирают со слизистой оболочки задней стенки глотки и зева сухим ватным тампоном, фиксируя язык шпателем. После взятия образцов тампоны помещают в пробирки с транспортной питательной средой, основой для которой служит среда для контроля стерильности (СКС). Кровь для бактериологического исследования забирают из локтевой вены в объеме 5-10 мл стерильным шприцем и засевают во флаконы с сахарным бульоном непосредственно « у постели больного» (соотношение крови и питательной среды должно быть не менее 1: 10 - 1: 20). Оптимальные сроки доставки патологического материала в бактериологическую лабораторию не должны превышать двух часов.

Бактериоскопическое исследование

Мазки для первичной бактериоскопии окрашивают по Граму. При положительном результате обнаруживаются грамположительные клетки сферической или слегка вытянутой формы диаметром менее 2 мкм , располагающиеся парами и цепочками различной длины. По мере старения культуры количество клеток, окрашивающихся грамотрицацельно , возрастает.

Бактериологическое исследование

Исследуемый материал засевают на селективные и неселективные питательные среды . Для выделения стрептококков групп А и В из смеси культур используют КМПА с неомицином, для выделения S. agalactiae - селективный бульон с налидиксовой кислотой и гентамицином, для выделения S.bovis - желчно-эскулиновый агар. Исследуемый материал обязательно засевается на 5 % кровяной агар, для приготовления которого используется кровь барана. Эта среда ингибирует рост Haemophilus haemolyticus, обладающего сходными с пиогенным стрептококком культуральными свойствами и являющегося постоянным обитателем "слизистой оболочки верхних дыхательных путей. В качестве среды обогащения используют бульон для стрептококков и среду для контроля стерильности (СКС). Культивирование стрептококков в условиях повышенной концентрации двуокиси углерода дает более пышный рост. Чашки с посевами помещают в эксикатор с плотно притертой крышкой или в анаэростат, на дно которых ставят зажженную свечу. Инкубирую посевы при температуре 37°С в течение 18-24 часов, изучают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. По характеру гемолиза на КМПА стрептококки делят на три группы: 1) негемолитические; 2) α-гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза за счет образования метгемоглобина; 3). β-гемолитические, образующие вокруг колоний прозрачную зону полного гемолиза. Представители первой группы обладают слабой вирулентностью и в большинстве случаев не имеют практического значения. Зеленящие стрептококки вегетируют на слизистой оболочке полости рта (S.salivarius, S.mutans, S.oralis), являются возбудителями крупозной пневмонии (Streptococcus pneumoniae). Бета-гемолитические стрептококки чаще всего являются источником заболеваний. Они вызывают скарлатину, рожистое воспаление, ангину, эндокардит, менингит, гнойно-воспалительные заболевания кожи, подкожной клетчатки, сепсис и постстрептококковые заболевания (ревматизм, гломеролонефрит).

Из подозрительных в отношении стрептококков колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для первых генераций стрептококков часто характерен полиморфизм: наряду с типичными шаровидными клетками встречаются вытянутые в длину кокки разной величины, распологающиеся парами, короткими цепочками и скоплениями неправильной формы.

На жидких питательных средах рост различных стрептококков имеет свои особенности. Для пиогенного стрептококка характерен придонно-пристеночный рост с образованием мелкозернистого осадка и сохранением полной прозрачности среды. Пневмококки дают придонный рост в виде пушистого рыхлого осадка с сохранением полной прозрачности или равномерным более или менее интенсивным помутнением бульона. S.pyogenes, S.bovis, S.agalactiae могут вызывать интенсивное помутнение бульона с образованием небольшого гомогенного осадка. В мазках приготовленных с жидкой среды стрептококки располагаются обычно в виде длинных цепочек (7-8 и более кокков). Для получения чистой культуры выросшие изолированные колонии пересевают на КМПА. колоний. Из флаконов с посевами крови делают высев на КМПА на вторые, четвертые девятые сутки для получения изолированных колоний.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по биохимическим, антигенным свойствам, чувствительности к антимикробным средствам.

Проба на каталазу. В каплю 3% раствора перекиси водорода на предметном стекле вносят с помощью стеклянной палочки изучаемую культуру. Положительный результат оценивается по выделению пузырьков газа. Стрептококки каталазной активностью не обладают.

Проба с бацитрацином и сульфаниламидами. Диски с названными препаратами, помещают на чашки с засеянной сплошным газоном культурой, инкубируют 18-24 часа в аэробных условиях. Большинство штаммов S.pyogenes (99%) чувствительны к бацитрацину, стрептококки групп С и G чувствительны к смеси сульфаметоксазола и триметоприма.

Гидролиз гиппурата натрия. В 0,4 мл 1% водного раствора гиппурата натрия вносят петлю чистой культуры, материал инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 2 часов. Затем добавляют 0,2 мл 3,5% раствора нингидрина в смеси бутанола и ацетона (1:1). Через 10 минут после повторной инкубации появляется пурпурное окрашивание. Этот тест основан на способности стрептококков группы В вызывать гидролиз гиппурата натрия.

Желчно - эскулиновый тест необходим для идентификации стрептококков группы Д (S.bovis), которые растут на желчно-эскулиновом агаре с образованием комплекса темно-коричневого или черного цвета. Исследуемую культуру засевают на агар, содержащий 40% желчи, 0,1%эскулина и 0,05% цитрата железа. Результат учитывается через 24-48 часов инкубации при температуре 37°С.

Рост в бульоне с 6,5% раствором NaCl. Стрептококки группы В, в отличие от других стрептококков, устойчивы к высокой концентрации NaCl. Результат учитывается через 24-48 часов инкубации при температуре 37°С.

Тест лизиса желчью. 10% раствор желчи лизирует молодую культуру пневмококка. При лизисе в опытной пробирке отмечается просветление. (В контрольной пробирке с сывороточным бульоном пневмококк дает придонный рост в виде пушистого рыхлого осадка)

Оптохиновый тест. От зеленящих стрептококков пневмококки отличаются высокой чувствительностью к оптохину. Рост пневмококка ингибируется оптохином в концентрации не более 5 мкг/мл. Зона ингибирования роста пневмококка вокруг диска с оптохином значительно превышает зону задержки роста прочих стрептококков.

Антигенная дифференциация стрептококков. В настоящее время по антигенному составу полисахарида клеточной стенки (субстанция С) стрептококки разделяют на 20 серологических групп, обозначаемых заглавными буквами латинского алфавита от А до V. Выпускаемые в настоящее время диагностикумы обеспечивают идентификацию стрептококков групп А, В, С, F, G по реакции преципитации. Внутри серогрупп стрептококки разделяют на серовары по специфичности белковых антигенов М, Р и Т, которые выявляются в реакции агглютинации. Серовары обозначаются цифрами. Большинство возбудителей различных стрептококковых инфекций относится к серогруппе А. Антигенную структуру пневмококков изучают в реакции агглютинации на стекле или в реакции Нейффельда с использованием набора сывороток к капсульным полисахаридам.

Иммунологическая диагностика стрептококковых заболеваний нашла признание при подтверждении диагноза ревматизма и направлена на определение титра антител к стрептолизину, гиалуронидазе, стрептокиназе в парных сыворотках по реакции нейтрализации ферментов.