Лабораторная диагностика лептоспироза

Материал -пробы воды (осадок после центрифугирования), продукты питания, кровь (в первые дни заболевания), сыворотка с 5 по15 день заболевания для обнаружения антител, моча (осадок) и СМЖ (исследуются с 10-16 дня болезни), секционный материал (готовят 10% взвесь, центрифугируют при 2 тыс. об./мин. 15 минут; исследуют надосадок).

Микроскопия

• осадка мочи (исследование на подвижность методом раздавленной капли) в темном поле микроскопа

• толстых мазков (крови, мочи), окрашенных по методу Гимзы

• негативное контрастирование с конго красным

• исследования мазков ИФМ

Бактериологическая диагностика

Условия культивирования

• Температурный оптимум 28-30°С

• Оптимальная концентрация хлорида натрия - 0,5%

• Оптимальный рН 7,2-7,6

Для культивирования в лабораторных условиях применяют жидкие питательные среды: пептонные бульоны, содержащие сыворотку и жирные кислоты (лептоспиры не способны синтезировать ЖК), разведенную сыворотку, полужидкую среду Флетчера, бульон Стюарта для лептоспир (к среде должно быть добавлено 10% кроличьей сыворотки), среду Ферворта-Вольффа и ее модификации.

Лептоспиры размножаются в питательной среде, мало изменяя ее внешний вид. При достаточном накоплении лептоспир при встряхивании пробирок с культурой в проходящем свете заметны муаровые волны, а в спокойном состоянии отмечают легкую опалесценцию. Поэтому для выявления роста лептоспир через 3, 5, 7, 10 дней и далее каждые 5 суток культивирования из всех пробирок готовят препарат «раздавленная капля» и микроскопируют в темном поле. Рост лептоспир может быть обнаружен на 5-20 день. При отсутствии роста в течение 3 месяцев результаты считают отрицательными. Лептоспиры также могут расти на хорион-аллантоисной оболочке (ХАО) куриных эмбрионов.

Серологическая диагностика

Серологическую диагностику проводят со 2-ой недели заболевания.

• ИФА

• РСК

• Реакция микроагглютинации и лизиса (РМАЛ) живой эталонной культуры лептоспир различных серогрупп. При использовании живых лептоспир вслед за их агглютинацией может произойти лизис.

Сыворотка больного титруется (от 1 : 10 до 1 : 600, смешивается с равным объемом /0,2 мл/ живой культуры; пробирки 2 часа инкубируются, содержимое микроскопируют. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир с образованием «кос» и «паучков». Диагностическим титром считается титр 1 : 100 и выше. Подтверждением серологического диагноза является нарастание титра антител при повторном исследовании крови, взятой через неделю.

• Реакция иммунослипчивой гемагглютинации

Лептоспиры могут быть адсорбированы на эритроцитах, которые склеиваются в присутствии гомологичных антител. Такая реакция гемагглютинации является группоспецифичной.

Биологический метод диагностики. Заражение лабораторных животных проводят для очистки культур лептоспир от посторонней микрофлоры, для исследования воды открытых водоемов, для выделения культуры лептоспир из контаминированного посторонней микрофлорой материала (моча больных, вода открытых водоемов, почва и др.).

Кровью, свежей плазмой или мочой больного заражают морскую свинку (модель для L. icterohemorrhagiae), молодых золотистых хомячков (модель для других лептоспир) или крольчат - сосунков. У морских свинок (вводят внутрибрюшинно 1мл материала) температура тела повышается до 40-41^оС, резко падает масса тела. На 5-10 день появляется желтушная окраска склер, слизистых оболочек, происходит кровоизлияние в органы и ткани. Через 2-3 дня после заражения животных исследуют экссудат брюшной полости на наличие в нем лептоспир путем микроскопии в темном поле и посева на питательные среды.

Заражение животных проводится также для установления патогенных свойств чистых культур. Крольчат – сосунков или золотистых хомячков заражают внутрибрюшинно 5-7 дневной культурой, содержащей 70-100 лептоспир в поле зрения микроскопа. Вирулентные культуры вызывают гибель золотистых хомячков в дозе менее 0,1 мл, средней вирулентности – 0,2-0,3 мл, слабовирулентные – 0,5 – 1мл.