Дифференциальные признаки возбудителя сибирской язвы и непатогенных бацилл

Таблица 5.

Признаки микроба	Название микроба
	B.anthracis	В. pseudo- anthracis	В. anthracoides	В. subtilis
Капсула	+	-	-	-
Подвижность	-	слабая	слабая	-
Гемолиз	-	+	+	-
Лакмусовая сыворотка	краснеет	синеет	синеет	синеет
Патогенность для животных	Патогенны	В больших дозах иногда патогенны для мышей		Непатогенна
Рост в бульоне	«Комочек ваты» на дне бульон прозрачен	Бульон мутнеет, на поверхности, крошковидный осадок	Бульон мутнеет, пленка на поверхности, крошковидный осадок	Плёнка на поверхности, среда мутная

Лабораторная диагностика туляремии

Материал - пунктат из бубона, соскоб из язвы кожи, содержимое пустулы, гнойное отделяемое конъюнктивы, мазок из зева, мокрота, кровь, органы грызунов (больных или погибших), переносчики (комары, слепни, клещи), объекты внешней среды (воздух, вода, пищевые продукты).

Микроскопия мазков-отпечатков, окрашенных по Романовскому-Гимзе (бактерии окрашиваются в красно-фиолетовые цвет).

Экспресс-методы диагностики

• Непрямой вариант ИФМ

• Кровяно-капельная реакция агглютинации: в каплю крови больного из пальца добавляем каплю дистиллированной воды (для гемолиза эритроцитов, что исключает псевдоагглютинацию) и каплю туляремийного диагностикума. Если титр антител у больного соответствует 1/100,то РА должна произойти за 2 минуты, если она происходит более чем через 2 минуты, то реакция считается сомнительной.

Серологическая диагностика

Исследования проводят в динамике заболевания, особенно у привитых людей. Возможны перекрестные реакции с бруцеллами и иерсиниями.

Биологический метод диагностики

Кожная проба. В/кожно вводят 0.1 мл тулярина, содержащего 100 млн. КОЕ/мл Francisella tularensis, убитых нагреваем до 70^о С. Реакцию учитывают на 1-2-3 сутки (осмотр и пальпация). Положительная проба учитывается при наличии инфильтрата разметом не менее 5 мм (отек и гиперемия). У больных туляремией сенсибилизация наступает рано, уже на 3-4 день (и сохраняется 5-6 лет после выздоровления).

Биологические пробы на животных

Выделить культуру посевом на среды обычно не удается. Поэтому исследуемым материалом заражают белых мышей (п/к), их гибель наступает на 3-4 сутки (при массивном заражении); морских свинок (в/бр) - гибель на 8-10-е сутки; крыс, кроликов. Крысы и кролики погибают лишь при заражении массивными дозами возбудителя (более 10⁹ микробных клеток). Кролики погибают от вирулентного микроба американского типа (тип А) при введении даже 1 микробной клетки. Другие типы франциселл для кроликов умеренно патогенны.

Бактериологическая диагностика

Бактериологический метод в диагностике тулерямии человека редко дает

положительные результаты, так как содержание возбудителей в материале всегда незначительное. Культуру выделяют после накопления ее на восприимчивых животных - белых мышах или морских свинках.

Выделение возбудителя от больного человека наиболее вероятно в лихорадочный период: из крови - до 10 суток от начала заболевания, из

первичных аффектов и пунктатов бубонов - до 2-3 недель.

Франциселлы хорошо культивируются в желточном мешке куриного эмбриона.

Условия культивации на питательных средах:

• Микробы инкубируют в атмосфере 10%-го СО₂

• Оптимальный рН 6,8-7,4

• Оптимальная температура 37-37°С

• Растут только на специальных средах с добавками цистеина как стимулятора роста, нативного белка (кровь), экстрактов тканей печени. В среды добавляют антибиотики, подавляющие рост других бактерий. Для выделения чистой культуры используют плотные среды: мозговой, печеночный и селезеночный агары, кровяно-цистеиновую среду.

На желточном агаре, (среда Мак-Коя и Чепина - свернутая желточная /яичная/) рост колоний наблюдается через 2-3 суток.

На кровяно-цистеиновой среде Francisella tularensis дает рост колоний в течение 2-14 суток. На плотных средах растут в виде мелких колоний, похожих на капельки росы, беловатого цвета с голубоватым оттенком (S-диссоциаты). R- формы колоний растут в виде нежного налета с неровной поверхностью.

В жидких средах размножаются хуже и растут только у поверхности среды.