Бактериологическая диагностика

Особенности культивирования

• Оптимальная температура культивирования 28-30°С,

• Оптимальный рН - 6,9-7,2.

• Использование для культивирования агара Хоттингера с добавлением стимуляторов роста (сульфит натрия, цельная кровь, экстракт культуры сарцин /стимулятор Карпузиди/) и ингибиторов роста других микроорганизмов (генцианвиолет в концентрации 1:50000 – 1:100000).

• Время инкубации - 18-20 часов.

1. Накопление суммарной культуры на жидких средах (МПБ, бульон Хоттингера). В жидких питательных средах J.pestis образуют пленку на поверхности, от которой ко дну тянутся слизистые нити, похожие на сталактиты, в последующем образуется хлопьевидный осадок.

2. Выделение чистой культуры на пластинчатых средах (МПА, агap Хоттингера, при работе с загрязненным материалом в среды добавляют генцианвиолет в концентрации 1:50000 -1: 100000). Хорошо растут в желатине, не вызывая разжижения, а также

в желточном мешке развивающихся куриных эмбрионов. На плотных средах

• через 8-12 часов под малым увеличением микроскопа обнаруживаются микроколонии (блестящие полиморфные образования, похожие на осколки истолченного «битого стекла»)

• Через 18-24 часа становятся светлыми с неровными краями;

• Через 48 часов начинает формироваться выпуклый центр колоний окруженный тонкой полупрозрачной зоной с неровным зазубренным краем в виде «кружевного платочка».

• Зрелые колонии крупные с бурым зернистым центром и неровными

краями в виде «ромашки».

При размножении на плотных средах преобладают удлиненные формы иерсиний.

S- формы колоний содержат авирулентные бактерии.

R- формы колоний характерны для вирулентных штаммов.

3. Накопление чистой культуры

Из подозрительных колоний (серовато-белые с плотным центром и полупрозрачной изрезанной периферией) делают отсев на скошенный МПА.

4. Идентификация микробного вида

Дифференцировка патогенных бактерий рода Yersinia Таблица 4.

Признаки микроба	Вид микроба
	Y.pestis	Y.pseudo-tuberculosis	Y.enterocolitica
Подвижность при 25о С	-	+	+
Вирулентность	R-форма	S-форма	S-форма
Расщепление мочевины	-	+	+
Образование орнитиндекарбоксилазы	-	-	+
Расщепление рамнозы	-	+	-
Расщепление инозита	-	-	+
Наличие факторов патогенности Y.pestis: -фракция 1 -пестицин 1	+	-	-
	+	-	-
- «мышиный токсин»	+	-	-
- плазмокоагулаза	+	-	-
-активатор плазминогена	+	-	-
Патогенность для вида животных	Крысы, морские свинки погибают через 2-3 дня (в/б заражение), при накожном – через 5-7 дней	Крысы не погибают, летальность только для морских свинок
Лизис бактериофагом (фагодиагностика по Фишеру): -псевдотуберкулезным -чумным	-	+	-
	+	-	+

Серологическая диагностика проводится с применением РА, РСК, РНГА, РП, ИФА, РН (тест иммунного повреждения нейтрофилов позволяет выявить антитела в 95% случаев используя реакцию нейтрализации).

Биологический метод диагностики

Кожная проба с пестицидом используется:

• для ретроспективной диагностики

• для определения напряженности постпрививочного иммунитета

Проба на животных

На животных можно провести реакцию нейтрализации токсинов. При снижении вирулентности микроба или использовании малой заражающей дозы перед заражением животным вводят глюкокортикоиды (для развития иммунодефицита). Морские свинки при внутрибрюшинном заражении погибают на 2-7-е сутки. Регионарные бубоны появляются, как правило, на 2-3-й день.