Вопросы для самоподготовки

1. История открытия и изучения легионелл.

2. Морфология и физиология.

3. Антигенная структура.

4. Экология и распространение.

5. Патогенез поражений.

6. Особенности иммунитета.

7. Лабораторная диагностика.

8. Профилактика и лечение.

Вопросы для самоконтроля

1. Какие заболевания вызывают легионеллы?

2. Среда обитания легионелл?

3. Основной путь передачи микроба?

4. Требовательность к питательным средам.

5. Как изменяются колонии при обработке УФО?

6. Какие механизмы способствуют внутриклеточному выживанию.

7. Особенности конструирования питательных сред.

8. Методы экспресс - диагностики легионеллезов.

Самостоятельная работа

1. Оценить результат РНГА, ИФА.

2. Составить схему микробиологической диагностики легионеллезов.

3. Решить предложенные ситуационные задачи. Микробиологическая диагностика легионеллеза

Легионеллы относятся к отделу Gracilicutes, семейству Legionellaceae, роду Legionella, который представлен 9 видами: L.pneumophila, L.bozemanii, L.micdadei, L.dumoffii, L gormanii,L.longbeachae, L.jordanis, L.wadsworthii, L.oakridgensis.

Легионеллы представляют собой мелкие грамотрицательные палочки длиной 2-3 мкм ( иногда выделяются более крупные формы до 20-50 мкм) с выраженной тенденцией к полиморфизму. Бактерии хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе, содержат жировые включения, окрашиваемые суданом черным; по Граму окрашиваются отрицательно. Легионеллы подвижны, спор не образуют..

Бактериальная клетка легионелл обладает целым набором факторов патогенности (эндотоксин, цитотоксин, гемолизин, протеаза, действующая на белки сыворотки крови).

Легионеллы являются аэробами, хорошо растут в присутствии СО₂, весьма пребовательны к условиям культивирования; растут только на специальных сложных средах. Для культивирования требуются максимально обогащенные среды со специальными добавками, такими как L-цистеин, пирофосфат железа. Наиболее оптимальной средой является угольно-дрожжевой агар (УДА). В целом для всей группы легионелл наиболее надежным методом считается культивирование в куриных эмбрионах.

Материал для исследований может быть представлен плевральной жидкостью, реже мокротой, кровью, мочой. Для исследований также используют транстрахеальный аспират, бронхоскопический. легочный биопсийный и аутопсийный материалы.

В диагностике применяют бактериологический, биологический (более надежный), серологический методы.

Микроскопический метод. Бактерии окрашиваются по Романовскому-Гимзе и Хименсу(исключение –нативный материал из мокроты).

Для экспресс диагностики можно мазки импрегнировать серебром или люминесцентной сывороткой.

Бактериологический метод. Первичный посев производят на забуференный УДА со всеми добавками и рН 6.9.первичный материал растет медленно, поэтому чашки инкубируют в течение 2-14 дней при 35°С во влажной атмосфере. Выросшие колонии обычно менее 2 мм в диаметре, полупрозрачные, бесцветные либо с сероватым оттенком, гладкие блестящие с приподнятым краем. На средах с тирозином образуют колонии с коричневым пигментом. Некоторые виды легионелл обладают аутофлюоресценцией – УФ лучи возбуждают бело-голубое свечение. Культуру, выросшую на УДА подвергают идентификации МФА (метод флюоресцирующих антител) с использованием люминисцирующих сывороток к основным серогруппам легионелл. В спорных случаях используют анализ жирных кислот, ДНК-гомологии, иммунологическое тестирование с набором поли- и моновалентных сывороток.

Определение чувствительности к антибиотикам не рекомендуется, так как результаты исследований in vitro могут не совпадать с клинической эффективностью.

Серологическая диагностика. Наиболее распространен непрямой вариант МФА и РНГА. Также используется ИФА. Четырехкратное нарастание титров антител (сероконверсия) свидетельствует о наличии активного инфекционного процесса и позволяет с высокой степенью надежности устанавливать или подтверждать диагноз. Недостатком этих методов следует считать ретроспективный анализ диагностики, так как выраженную сероконверсию можно выявить лишь на 2-3 неделе заболевания.

Непрямой метод флюоресцирующих антител. Убитую кипячением культуру легионелл наносят на предметное стекло и фиксируют. На препарат наносят сыворотку больного с разведением 1:32 и более. После 15 минут инкубации наносят люминесцирующий иммуноглобулин против глобулинов человека, повторно инкубируют, промывают в фосфатном буфере и микроскопируют. Максимальное разведение сыворотки, в котором обнаруживается специфическое свечение, является титром специфических антител (диагностический титр-1:64).

ИФА. Применяют непрямой вариант метода.

Иммунологические экспресс методы по выявлению антигенов.

Наибольшее распространение получил прямой метод МФА, который используется для ранней диагностики легионеллеза и при проведении моторинга за различными водными системами и сооружениями на наличие легионелл. По чувствительности не уступает культуральному методу и позволяет обнаружить возбудителей в нативном материале (за исключением мочи) независимо от их жизнеспособности. На приготовленный из нативного материала и фиксированный в ацетоне мазок наносят каплю легионеллезной люминесцирующей сыворотки и инкубируют во влажной камере 15-20 минут при 37°С. После промывки в фосфатном буфере мазок просматривают в люминесцентном микроскопе. В положительных случаях обнаруживается изумрудно-зеленое свечение легионеллезных бактерий.

ИФА позволяет выявить легионеллезный антиген в клиническом материале, включая мочу, и представляет собой прямой вариант реакции.

Реакция коагглютинации является специфическим и чувствительным методом определения легионелл в материале различного происхождения. В реакции используются золотистые стафилококки, меченные легионеллезными иммуноглобулинами.

ТЕМА: МИКОБАКТЕРИИ

Обоснование темы: Рост заболеваемости туберкулёзом и микобактериозами в России, выраженная резистентность микобактерий к ПТП (противотуберкулезным препаратам) обязывают всесторонне изучать биологию микобактерий, современные методы диагностики туберкулеза, микобактериозов, лепры.

Цель обучения: сформировать представление о биологических свойствах возбудителей туберкулёза, микобактериозов, лепры, особенностях формирования инфекционного процесса, защитных реакций организма, научить микробиологической диагностике, основам рациональной антимикробной терапии, специфической профилактике.

Студент должен знать:

1. Причины кислото - и спиртоустойчивости микроорганизмов, методы выявления кислотоустойчивых бактерий.

2. Пути передачи возбудителей.

3. Неспецифические и специфические факторы защиты при внутриклеточных инфекциях.

4. Принципы лабораторной диагностики инфекции.

5. Принципы этиотропной профилактики и терапии.

Студент должен уметь:

1. Правильно собрать материал и правильно выбрать методы его исследования.

2. Расшифровать результаты лабораторных методов исследования.

3. Выполнять общедоступные лабораторные методы (окраска препаратов по Граму, Циль-Нильсену).