2.3.3. Проба Вельтмана

В пробе коагуляция наступает при прибавлении меньшего количества раствора хлорида кальция при паренхиматозном поражении печени. Коагуляция при прибавлении большего количества раствора хлорида кальция наблюдается при ревматизме, туберкулезе легких.

Принцип метода: При добавлении к сыворотке крови раствора хлорида кальция и нагревании происходит уменьшение коллоидной устойчивости сыворотки крови.

Реактивы:

1. Кальция хлорид 0,5 %.

2. Материал для исследования: сыворотка крови без гемолиза.

Ход определения: К 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 4,9 мл воды, перемешивают, прибавляют 0,1 мл 0,5-ного раствора хлорида кальция, встряхивают и прогревают пробирку над пламенем спиртовки. Охлаждают пробирку и смотрят на свету, если хлопьев нет, то в эту же пробирку добавляют еще 0,1 мл хлорида кальция и вновь греют. Процедуру повторяют пока не выпадут хлопья.

Нормальные величины: В норме коагуляция наступает при прибавлении 0,4-0,5 мл раствора хлорида кальция.

2.2. Белковые фракции. Основные методы фракционирования белков сыворотки крови

Состав фракций белков, выделяемых в биологических жидкостях, в значительной степени зависит от применяемого метода. Основные методы исследования белков сыворотки крови:

• высаливание нейтральными солями,

• электрофоретическое фракционирование,

• иммунологические методы,

• седиментационный способ,

• хроматография,

• гель-фильтрация,

• осаждение этиловым спиртом при низкой температуре.

Наиболее информативными являются электрофоретические методы разделения.

При электрофоретическом разделении через исследуемую сыворотку, помещенную в камеру с буферным раствором, пропускают электрический ток определенной силы и напряжения. В зависимости от электрического заряда и других физических и химических свойств белковые фракции передвигаются к одному из полюсов. Количество выделенных белковых фракций зависит от применяемой поддерживающей среды. В качестве поддерживающей среды при электрофорезе применяют бумагу, пленки ацетат целлюлозы, гели крахмала, сефадекса, полиакриламида, агара и комбинированные среды.

Электрофорез на бумаге. Оценка результатов производится фотометрически после элюирования отдельных фракций белков или на денситометре. Общее количество фракций получается небольшое:

• альбумин, самая большая и наиболее быстро движущаяся к аноду фракция, выявляется обычно в виде одного белка, составляет наиболее заметную фракцию

• α1-глобулины, включает многие индивидуальные белки, в том числе: а1 антитрипсин, серомукоид, антихимотрипсин, транскортин, тироксин-связывающий глобулин,

• α2-глобулины, зона в которой много белков, например, антитромбин 111, эритропоэтин, плазминоген, церулоплазмин, гаптоглобин , холинэстераза, макроглобулин и другие,

• β-глобулины включают трансферрин, фибриноген, транскобаламин, С- реактивный белок, липопротеины,

• γ-глобулины - наиболее медленно движущаяся к аноду фракция содержит иммуноглобулины Ig G, IgA, Ig M, Ig D, Ig E.

Электрофорез на пленках из ацетата целлюлозы, гелях полиакриламида обладает рядом преимуществ: одинаковый размер пор позволяют увеличить четкость разделения, время, необходимое для разделения, значительно меньше, чем при электрофорезе на бумаге. Для получения четкой электрофореграммы достаточно 0,1-0,3 мкл образца.