2.3.1. Тимоловая проба

Тимоловый реактив представляет собой насыщенный водный раствор тимола в буфере. Проба является положительной при уменьшении альбуминов и увеличении β- и γ-глобулинов.

Принцип метода: при взаимодействии сыворотки крови с тимолово-вероналовым раствором появляется помутнение вследствие образования глобулино - липидного комплекса.

Реактивы:

1. Тимол, 10%-ный спиртовый раствор: 10 г очищенного тимола растворяют в 96%-ном этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл.

2. 5,5 Диэтилбарбитуровая кислота (веронал).

3. Мединал (диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль).

4. Буферный раствор: 2,76 г веронала и 2,06 г мединала растворяют и доводят до 1 л водой.

5. Тимоло-вероналовый буфер рН 7,55-7,6: в мерной колбе на 100 мл смешивают 80 мл буферного раствора и 1 мл 10%-ного спиртового раствора тимола, встряхивают и доливают буферным раствором до метки.

6. Бария хлорид.

7. Калибровочный раствор:

   1. раствор хлорида бария 1,175 г хлорида бария растворяют и доводят до 100 мл водой.

   2. серная кислота 0,1 моль/л. Суспензия сульфата бария: 3 мл раствора хлорида бария наливают в мерную колбу на 100 мл и доводят объем до метки 0,1 моль/л раствором серной кислоты.

8. Материал для исследования: сыворотка свободная от гемолиза.

Ход определения: К 6 мл тимолово-вероналового буферного раствора прибавляют 0,1 мл сыворотки, оставляют на 30 минут и затем измеряют оптическую плотность при длине волны 630-690 нм (красный светофильтр) против тимолово-вероналового буфера в кюветах с толщиной 1 см. Реакцию проводят при комнатной температуре. Расчет ведут по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика: из калибровочного раствора сульфата бария (суспензия) готовят разведения, соответствующие единицам помутнения. Калибровочные растворы хорошо встряхивают и при длине волны 630-690 нм в кюветах с толщиной слоя 1 см против воды измеряют.

Суспензия бария BaSO4, мл	0,1 моль/мл раствор серной кислоты, мл	Единицы помутнения
1,35	4,65	5
2,7	3,3	10
5,4	0,6	20

Нормальные величины: 0-4 ед.

2.3.2. Сулемовая проба

Принцип метода: Сулема в присутствии мелкодисперсных коллоидов (белков) образует коллоидный раствор солей ртути. Нарушение дисперсности белковых фракций сыворотки крови вызывает осаждение грубодисперсных частиц.

Реактивы:

1. Сулема, 1 г/л раствор: 0,1 г двухлористой ртути растворяют в воде в мерной колбе на 100 мл.

2. Натрия хлорид, 154 ммоль/л.

3. Материал для исследования. Сыворотка крови, свободная от гемолиза.

Ход определения: К 0,5 мл сыворотки крови добавляют 1 мл 154 ммоль/л раствора NаСI и титруют 1 г/л раствором сулемы. После появления первоначально обратимого помутнения титруют медленно с интервалом 20-30с до стойкого помутнения. Результаты сулемовой реакции выражают в количестве мл раствора сулемы, пошедшего на титрование.

Нормальные величины: 1,6 – 2,2 мл сулемы.