1. Приготовление и исследование густых экстрактов шиповника

1. Сырье

Для приготовления экстрактов использовали сушёный шиповник. Шиповник был собран в июне - июле 2011 г. Сушили сырьё при комнатной температуре без доступа солнечного света.

2. Определение влажности

1. Сырье измельчали; навеску помещали в предварительно взвешенную вместе с крышкой и пронумерованную бюксу.

2) В сушильный шкаф, нагретый до 100-105 ⁰С, быстро помещали подготовленные бюксы с навесками вместе со снятыми крышками. По истечении времени бюксы охлаждали и определяли их массу. Высушивание проводили до постоянной массы.

3) Влажность сырья вычисляли по формуле:

Х = , (2.1)

где - масса сырья до высушивания, г;

- масса сырья после высушивания, г.

3. Методика приготовления гексанового экстракта листьев шиповника (экстракция в аппарате Сокслета)

Масса шиповника для экстракции = 25,00 г.

Навеску измельченных листьев шиповника (1 мм) экстрагировали гексаном. Соотношение сырьё: экстрагент составило 1:10 (25 г шиповника : 250 мл гексана).

Из обезжиренной фильтровальной бумаги изготавливают два патрона и берут навески измельченной массы. Измельчённое сырье помещают в патрон из фильтровальной бумаги (масса патронов с навесками m=29,14 г), переносят в аппарат Сокслета и экстрагируют гексаном в течение 5-6 часов.

Процесс выделения основан на сходстве выделяемого компонента с растворителем: при пропускании последнего через смесь он «захватывает» с собой нужное вещество и выводит его из системы. Таким образом, на выходе получается смесь экстрагируемого вещества с растворителем, следовательно, в этой смеси не должно происходить никаких химических реакций (компоненты должны быть инертны друг к другу, наличие примесей в растворителе также может привести к нежелательным изменениям). Дальнейшее разделение основано на испарении растворителя, желательно использовать низкокипящие растворители, чтобы избежать термического разложения экстрагируемого вещества. Экстрагируемый компонент концентрируется в емкости для растворителя.

Достоинство этого метода экстракции в том, что с навеской постоянно контактирует чистый горячий растворитель (гексан), поэтому экстракция протекает быстро и эффективно.

Окончание процесса обезжиривания определяли по празрачности растворителя (гексана), который при кипении конденсировался и возвращался в экстрактор. В колбе оставались липофильные вещества, гексан окрашивался в густо зеленый цвет.

По окончании экстракции экстрактор разгружают, патроны с навесками извлекают и высушивают до постоянной массы (масса патронов с навесками после экстракции m=27,55 г).

4. УФ-спектрофотометрия экстрактов шиповника

Для количественного определения флавоноидов в растительном сырье наибольшее распространение получили физико-химические методы, прежде всего фотоколориметрия и спектрофотометрия. Они имеют ряд существенных преимуществ в сравнении, например, с гравиметрическими и титрометрическими методами, а именно быстрота и точность определения, обнаружение даже незначительных количеств и, что особенно важно, возможность выделения отдельных флавоноидов из растительного сырья.

Исследование качественного состава экстрактов шиповника проводили спектрофотометрическим методом.

Спектрофотометрический метод, основанный на способности флавоноидов поглощать свет в УФ - области спектра. УФ - спектр флавоноидов характеризуется наличием, как правило, двух максимумов поглощения. Положение максимумов и их интенсивность — характерные для разных групп флавоноидов. УФ - спектроскопия успешно используется для установления свободных ОН - групп в молекуле флавоноида путем добавления различных реактивов (ацетата натрия, метилата натрия, борной кислоты с ацетатом натрия, хлористого алюминия и т.д.). При добавлении этих реактивов происходит смещение максимумов поглощения, характерное для гидроксильных групп в разных положениях.

Для определения количественного содержания флавоноидов в последнее время широко применяется дифференциальный спектрофотометрический метод, основанный на комплексообразующей реакции алюминия хлорида с использованием в качестве стандарта ГСО рутина.

Спектры оптического поглощения экстрактивных вытяжек регистрировали на спектрофотометре Specord-M40 при комнатной температуре в диапазоне длин волн 220-800 нм. Раствором сравнения служил ацетон и гексан.

• Приготовления гексанового раствора экстракта шиповника:

Навеску густого экстракта помещали в пенициллинку и заливали 3 мл гексана. Тщательно перемешивали до полного растворения. Концентрацию окрашенных экстрактов проводим по формуле:

УФ-спектр экстракта шиповника относительно гексана

• Приготовления ацетонового раствора экстракта шиповника:

Навеску экстракта 0,02946г разбавили 3 мл ацетона. Тщательно перемешали до полного растворения при нагревании. Из полученного раствора дозатором отобрали 120 мкл и разбавили 5 мл ацетона.

УФ-спектр экстракта шиповника относительно ацетона

Анализ УФ-спектров экстрактов шиповника относительно гексана и ацетона

Экстракт, концентрация, г/мл спирта	Наличие пика λ, нм; А	наличие плеча λ, нм
Гексановый раствор (4,7 ·10-4)	λ=665,95, А=0,2871 λ=408,96, А=0,7821	λ=603-612, А=0,0807-0,0815 λ=531-537, А=0,1005-0,1002 λ=465-468, А=0,2059-0,2055
Ацетоновый раствор (2,36·10-4)	λ=669,00, А=0,7821 λ=532,98, А=0,4685 λ=472,96, А=1,3637 λ=410,07, А=3,1835	λ=608-612, А=0,3706-0,3705 λ=440-442, А=1,6180-1,6194

Согласно литературным данным веществами, имеющими интенсивные полосы поглощения при 250-270 и 340-380 нм, являются флавоноиды. Т.о., можно сделать вывод, что характер спектров экстрактов определяется веществами флавоноидной природы.