Показатели индуцированной агрегации тромбоцитов (по методу Born) при различных нарушениях сосудисто-тромбоцитарного гемостаза.

Патология гемостаза	АДФ	Арахидоновая кислота	Коллаген	Адреналин	Ристоцетин
Тромбоцитопатия	Норма или снижение*	Норма или снижение*	Норма или снижение*	Норма или снижение*	Норма
Влияние аспирина или других нестероидных противовоспалительных препаратов	Норма или снижение (часто умеренное) с нарушением второй волны	Отсутствие или значимое снижение	Норма для концентрации 5 μg/ml или снижение для концентрации 2 μg/ml	Снижение с нарушением формирования второй волны на агрегато­грамме	Норма или умеренное снижение
Нарушения пула хранения	Норма или снижение (часто умеренное) с нарушением второй волны	Норма	Норма или умеренное снижение	Снижение с нарушением формирования второй волны на агрегато­грамме	Норма
Дефект рецептора коллагена (GP Ia/IIa или GP V)	Норма	Норма	Отсутствие или значимое снижение	Норма	Норма
Синдром Бернара-Сулье	Норма	Норма	Норма	Норма	Отсутствие или значимое снижение
Дефекты активности тромбоксансинтетазы	Снижение (часто умеренное) с нарушением второй волны	Отсутствие или значимое снижение	Чаще умеренное снижение	Снижение с нарушением формирования второй волны на агрегато­грамме	Норма
Болезнь Виллебранда	Норма	Норма	Норма	Норма	Отсутствие или значимое снижение (иногда норма при субтипе 2N, повышение при субтипе 2В)
Афибриногенемия	Снижение или отсутствие	Снижение или отсутствие	Снижение или отсутствие	Снижение или отсутствие	Норма

4. Наименование исследования. Фактор Виллебранда (ФВ).

Характеристика структуры и свойств вещества. Фактор Виллебранда принадлежит к семейству адгезивных протеинов и является крупным мультимером, состоящим из 50-100 одинаковых субъединиц и имеющим довольно большую молекулярную массу (от 500 тыс до 20 млн дальтон); адгезивность мультимеров тем выше, чем больше их молекулярная масса. Синтез этого белка осуществляется в эндотелиальных клетках и мегакариоцитах, димеры и мультимеры формируются из субъединиц с помощью дисульфидных связей. Мультимеры фактора Виллебранда хранятся в α-гранулах тромбоцитов и тельцах Вибеля-Палада эндотелиальных клеток, откуда попадают в кровь. Циркулирующие в сосудистом русле мультимеры ФВ расщепляются на олигомеры, димеры и мономеры металлопротеиназой ADAMTS-13.

Роль аналита в физиологических процессах. Фактор Виллебранда, связываясь с коагуля­ционным фактором VIII, защищает его от протеолиза, а также служит кофактором адгезии тромбоцитов к компонентам субэндотелия (коллагеновые волокна, микрофибрилы), имеющим центры связывания этого мультимерного белка.

Преаналитические особенности. Содержание фактора Виллебранда определяется в цитратной бедной тромбоцитами плазме.

Интерференции. Концентрация фактора Виллебранда может возрастать после физических упражнений, при стрессовых ситуациях, беременности, кровотечениях, инфекционных заболева­ниях, терапии эстрогенами. У женщин в разные фазы месячного цикла возможны колебания уровня ФВ; для стандартизации интерпретации данных неко­торые эксперты рекомендуют для определения ФВ у женщин брать кровь на 5-7 дни менструального цикла.

Аналитические технологии, методики исследования. Ввиду большого разнообразия аномалий ФВ для диагностики болезни Виллебранда используется целый комплекс тестов. Основной метод определения концентрации ФВ – твердофазный ИФА.

Поскольку в норме фактор Виллебранда, образуя комплекс с коагуляционным фактором VIII, защищает его от протеолиза, то при многих вариантах болезни Виллебранда активность ф.VIII из-за быстрой деградации снижается. Для опре­деления содержания ф.VIII оценивают время свертывания смеси дефицитной по ф.VIII субстратной плазмы, АЧТВ-реагента и разведенной исследуемой плазмы после инкубации и добавления хлорида кальция. Результаты исследования очень важны для диагностики субтипа 2N болезни Виллебранда, поскольку при этом варианте патологии значительно снижается активность антигемофильного глобулина.

Референтные пределы. Референтные пределы, как правило, указываются в инструкции к наборам реагентов. У пациентов с первой группой крови уровень фактора Виллебранда примерно на 10% ниже, чем у других пациентов, что следует помнить при диагностике этого геморрагического заболевания.

Интерпретация результатов.

Таблица 3

Классификация болезни Виллебранда

Тип и субтип заболевания		Характеристика нарушения
Тип 1 (количественный дефект)		Недостаточная продукция ФВ
Тип 2 (качественный дефект)	Субтип 2А	Отсутствие крупных мультимеров ФВ
	Субтип 2В	Повышенная аффинность ФВ к тромбоцитарному рецептору GP Ib в сочетании с отсутствием крупных мультимеров ФВ
	Субтип 2М	Сниженная аффинность ФВ к GP Ib тром­боцитов без нарушения мультимерной структуры
	Субтип 2N	Снижение сродства ФВ к фактору VIII
Тип 3 (количественный дефект)		Отсутствие ФВ

Клиническое применение результатов исследования. При этой патологии в ряде случаев существенно ухудшается качество жизни пациентов, а в других ситуациях это заболевание неожиданно проявляется массивными, нередко угрожающими жизни геморрагиями во время операций, родов, при травмах и других состояниях у лиц, считавших себя здоровыми.

Знание типа болезни Виллебранда дает возможность выбора терапии, поскольку некоторые гемостатические препараты обладают разной эффективностью при лечении и профилактике кровотечений у пациентов с различными вариантами этого заболевания..

Использование фактора Виллебранда в качестве маркера эндотелиальной дисфункции основано на том факте, что ФВ синтезируется и хранится в клетках сосудистой выстилки, и повреждение эндотелия практически всегда сопровождается повышением содержания ФВ в плазме крови. Повышение содержания ФВ может отражать негативные прогностические тенденции при сердечно-сосудистой патологии, сахарном диабете, патологии почек, гестозах и других заболеваниях.

β-Тромбоглобулин (-ТГ).

Тромбоглобулины – группа иммунологически идентичных протеинов, отличающихся друг от друга лишь числом амино­кис­лотных остатков в цепи. В мегакариоцитах и неактивированных тромбоцитах содержатся два основных вещества из этой группы – PBP (platelet basic protein) и CTAP-III (connective tissue-activating peptide III). Еще один представитель этой группы веществ – -тромбоглобулин – в интактных тромбоцитах отсутствует, и образуется в них лишь после активации и агрегации.

Роль аналита в физиологических процессах. β-тромбоглобулин появляется в крови в результате высвобождения из альфа-гранул тромбоцитов, где он накапливается и хранится. Окончательно физиологическая роль этого протеина не определена.

Аналитические технологии, методики исследования. В основе определения β‑ТГ лежит принцип твердофазного ИФА со связыванием антигена и антител, поэтому специфичность и чувствительность достаточно высоки.

Референтные пределы. Не более 80 мкг/л или 10-50 МЕ/мл (зависит от метода исследования).

Клиническое применение результатов исследования. Определив повышение уровня ‑тромбоглобулина в плазме, можно установить гиперагрегацию тромбоцитов при различных патологических состояниях – инфаркте миокарда, венозном тромбоэмболизме, искусственных клапанах сердца, периферических расстройствах кровообращения, сахарном диабете, раке и др. Применение антиагрегантов снижает концентрацию -ТГ, поэтому тест можно использовать в качестве дополнительного для контроля эффективности лечения этими препаратами.