- •Простые методы окраски мазков
- •Выделение чистых культур аэробных и анаэробных бактерий
- •4.Санитарно - показательные микробы и предъявляемые к ним требования.
- •Сложные методы окраски мазков.
- •2.Температура роста и рН среды .
- •3.Трансдукция. Виды. Механизм специфической трансдукции.
- •4. Дисбиоз. Понятие. Нормальная микрофлора кожных покровов человека
- •2. Культуральные свойства бактерий.
- •3.Трансдукция. Виды. Механизм абортивной трансдукции.
- •4. Микрофлора почвы. Критерии оценки санитарного состояния. Факторы, влияющие на видовой состав микрофлоры почвы.
- •1.Понятие о штамме, клоне, популяции.
- •2.Споры. Этапы споруляции. Назначение. Образование споры-постоянный признак определённого вида бактерий вида бактерий (генотипический) или нет (фенотипический)?
- •3.Модификационная изменчивость. Понятие. Значение. Примеры.
- •4. Бгкп. Понятие. Значение для определения санитарного состояния подразделений лпу.
- •Капсула и слизь у бактерий. Хим. Состав, отличия, функции, назначения.
- •2.Рост и размножение бактерий. Пигменты, химический состав и значение.
- •3.Организация генетического материала у бактерий. Генотип. Фенотип.
- •4.Санитарно - показательные микробы воздуха помещений хирургического стационара. Методы исследования воздуха.
- •1.Жгутики бактерий. Строение, назначение, расположение.
- •2.Элективные, селективные, среды обогащения. Особенности. Назначение
- •4. Санитарно - показательные микробы при исследовании смывов с оос в хирургических стационарах. О чем свидетельствуют положительные находки.
Билет №11
Простые методы окраски мазков
Простыми методами окрашивания называют окрашивание препаратов каким-либо одним красителем. Чаще всего при этом используется фуксин, генциановый фиолетовый, метиленовый синий.
Выделение чистых культур аэробных и анаэробных бактерий
Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. Для выделения чистой культуры аэробов используют методы, основанные на:
1. Механическим разобщением бактериальных клеток;
2. Действии физических и химических факторов, оказывающих избирательное действие;
3. Способности некоторых бактерий размножаться в организме.
Метод Дригальского основан на механическом разобщение на поверхности плотной питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуемого материала.
I этап.
1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление мазка, окраска по Граму).
2. Посев в чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового материала, засевают вторую и третью чашки.
3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37°
II этап.
1. Микроскопическое изучение колонки по величине, форме, окраске, характеру поверхности, краев, консистенции колонии.
2. Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовление мазка, окраска по Граму).
3. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным ога-ром.
4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С. III этап.
Проверка культуры на чистоту (макроскопическим — однородный рост, микроскопическим- однородные по морфологическим признакам и тинкториальным признакам клетки). Идентификация проводится по:
- ферментативным свойствам.
- антигенным свойствам фагочувствительности токсигенности и другим признакам
Особенности физиологии анаэробных бактерий
Анаэробные микроорганизмы в отличие от аэробов не только не нуждаются для своей жизнедеятельности в кислороде воздуха, но, последний, в ряде случаев, для них является даже губительным. Окисление субстрата в бактериальной клетке может осуществляться прямым окислением вещества кислородом воздуха (аэробный путь) или же путем дегидрирования (отнятия от субстрата водорода), что происходит как в аэробных условиях (аэробное дегидрирование), так и в анаэробных (анаэробное дегидрирование).
Аэробное дегидрирование при широком доступе кислорода заканчивается окислением субстрата до конечных продуктов, при этом выделяется вся заключенная в субстрате энергия. Но оно может быть неполным, и образующиеся продукты окисления могут содержать еще большее количество энергии.
Анаэробное дегидрирование протекает в бескислородной среде. Конечными акцепторами водорода при этом могут быть углерод, азот, сера восстанавливающиеся до СН^, .NH^, HS^. Высвобождающаяся при этом энергия невелика, но образовавшиеся промежуточные продукты содержат еще значительное количество заключенной в них энергии. И аэробный и анаэробный типы окисления не могут идти без участия определенных ферментов, причем анаэробный путь окисления у микроорганизмов превалирует. Некоторые микроорганизмы способны менять аэробный тип дыхания на анаэробный и обратно- это факультативные анаэробы. Другие микроорганизмы способны жить только в отсутствии свободного кислорода – облигатные, т.е. обязательные, анаэробы.
Методы создания анаэробных условий
Физические методы. Основаны на выращивании микроорганизмов в безвоздушной среде, что достигается:
1) посевом в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества;
2) посевом микроорганизмов в глубину плотных питательных сред;
3) механическим удалением воздуха из сосудов, в которых выращиваются анаэробные микроорганизмы;
4) заменой воздуха в сосуде каким-либо индифферентным газом.
3.Трансдукция. Виды. Механизм неспецифической трансдукции
Трансдукция - передача бактериальной ДНК посредством бактериофага. В процессе репликации фага внутри бактерий фрагмент бактериальной ДНК проникает в фаговую частицу и переносится вместе с ней в бактерию-реципиент. При этом фаговые частицы как правило дефектны, они теряют способность к репродукции. Так как трансдуцируются лишь небольшие фрагменты ДНК, вероятность рекомбинации, затрагивающей какой-то определенный признак, очень мала: она составляет от 10 -6 до 10 -8 . Существуют три типа трансдукции: неспецифическая (общая), специфическая и абортивная.
Общая (неспецифическая) трансдукция - перенос бактериофагом фрагмента любой части бактериальной хромосомы. В клетке, инфицированной бактериофагом, в ходе сборки дочерней популяции в головки некоторых фагов может проникнуть фрагмент бактериальной ДНК или плазмиды либо вместе с вирусной ДНК, либо вместо нее. Этот процесс происходит вследствие того, что бактериальная ДНК фрагментируется после фаговой инфекции и кусочек бактериальной ДНК того же размера, что и фаговая ДНК, проникает в вирусную частицу с частотой приблизительно 1 на 1000 фаговых частиц. При такой форме трансдукции в клетки-реципиенты могут быть внесены практически любые гены. Феномен неспецифической трансдукции может быть использован для картирования бактериальной хромосомы.