2.2. Методы исследования

Углеводы, в частности альдозы, определялись иодометрическим методом (по Вильштеру и Шудлю). Тщательно измельченную навеску вещества (1г.) переносят в колбу емкостью 100 мл, растворяют в воде и доводят водой до метки. Затем содержимое колбы фильтруют или центрифугируют, из фильтрата в колбу Эрленмейера отбирают 10 мл раствора, что соответствует 0,1 г исходного вещества. В колбу добавляют 25 мл 0,1 н. раствора иода и через 2—З мин при энергичном помешивании медленно наливают 35 мл 0,1 н. раствора NаОН до исчезновения окраски иода. Колбу закрывают хорошо пригнанной резиновой или притертой стеклянной пробкой и ставят на 20 мин. в темное место. Затем колбу вынимают, добавляют в нее 1 н. раствора Н2SО4 и оттитровывают выделившийся иод 0,1 н. раствором Na2S2O3, добавляя к концу титрования раствор крахмала в качестве индикатора. Одновременно проводят контрольный опыт с 10 мл дистиллированной воды. Количество глюкозы (в %) при данном анализе вычисляют по формуле

R = (a-b) ×0,009×υ1×100/g×υ2

где а — количество раствора Na2S2O3, пошедшее на титрование в контрольном опыте; b — количество раствора Na2S2O3, пошедшее на титрование в рабочем опыте; 0,009 — титр глюкозы по иоду (молекулярная масса глюкозы 180, эквивалент 90, титр 0,1 н. раствора 0,009); υ1 - объем растворения навески; g — навеска; υ2 — объем, взятый для титрования [17]. Данный эксперимент проводился в пяти повторениях.

Для качественного определения содержания аскорбиновой кислоты использовались следующие методы.

Реакция с калия перманганатом [8]. К 1 мл реактива раствора перманганата калия по каплям добавляют извлечение из сырья, содержащее аскорбиновую кислоту. Наблюдают обесцвечивание раствора перманганата калия вследствие восстановления марганца до Mn ²⁺:

Реакция с раствором йода. К 1 мл реактива раствора йода по каплям добавляют извлечение из сырья, содержащее аскорбиновую кислоту. Наблюдают обесцвечивание раствора [8]:

Наличие следов алкалоидов определялось методом извлечения. Растения грубо измельчают, помещают в пробирку, заливают 1% раствором соляной кислоты так, чтобы кислота покрывала весь материал (1:10) и нагревают до начала кипения. До охлаждения жидкость фильтруют через фильтр и испытывают на присутствие в нем алкалоидов, для чего 1-2 капли фильтрата помещают при помощи стеклянной палочки на часовое стекло, рядом с ним наносят каплю реактива Вагнера и осторожно наклоняя стекло, обе капли соединяют. При слиянии капель, в случае присутствия алкалоидов жидкость мутнеет, а затем происходит выпадение трудно растворимых солей алкалоидов с реактивом Вагнера (осадок бурого цвета) [8].

Сапонины исследовались реакцией Лафона. К 2 мл водного настоя прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, 1 мл этилового спирта и 10 капель 10% раствора сернокислого железа. При нагревании появляется сине-зеленое окрашивание [8].

Для получения вытяжки пигментов из высших растений навеску листьев массой до 0,5 г тщательно растирают в сухой фарфоровой ступке с небольшим количеством спирта. Ступку и пестик ополоснуть небольшим количеством растворителя. Измельчённый растительный материал фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Для окончательной экстракции пигмента общий объём экстракта в пробирке доводят до 5 мл. Для расчёта концентрации хлорофилла в вытяжке пигментов определяют оптическую плотность вытяжки на электрофотокалориметре при длинах волн, соответствующих максимумам поглощения определяемых пигментов в данном растворителе: λ = 663, l кюв. = 1 см.

Х (%) = 1,3×m×100/V×D×l,

где Х (%) – содержание хлорофилла; m – масса навески, г; V – объем вытяжки, мл; D – оптическая плотность; l – толщина кюветы [23, 11].

Определение общей кислотности растения проводилось по следующей методике. Свежие или консервированные плоды, ягоды и овощи измельчают на терке и после тщательного перемешива­ния отвешивают на весах ВЛТК-500 в тарированной фарфоровой чашке 25 г мезги. Навеску без потерь смывают дистиллированное водой в мерную колбу вместимостью 250 см³. Удобнее всего поль­зоваться колбой Штифта. Объем жидкости в колбе доводят ди­стиллированной водой примерно до 150 см³ и колбу устанавливают в водяную баню, где температуру поддерживают на уровне 80°С.

Экстракцию органических кислот проводят выдерживанием колбы в водяной бане в течение 30 мин при перемешивании со­держимого колбы через каждые 5 мин. Затем содержимое колбы охлаждают (можно под струей холодной воды) и объем доводят до черты дистиллированной водой. Колбу закрывают пробкой, тщательно перемешивают содержимое и фильтруют через фильтр или вату; 50 см3 фильтрата пипеткой переносят в стакан или коническую колбу вместимостью 250—300 см³ и титруют в при­сутствии 3— 4 капель индикатора (фенолфталеина или комбини­ронянного) 0,1 н. раствором NaOH до изменения окраски. Фенол­фталеин при рН 8,2 изменяет окраску в фиолетовую, а смешанный индикатор при рН 7 дает фиолетово-синее окрашивание с переходом в зеленую при щелочной реакции титруемого раствора.

При титровании темноокрашенных растворов завершение тит­рования устанавливают по изменению окраски синей лакмусовой бумажки от капли титруемого раствора. Если лакмусовая бумага не окрасится в красный цвет от капли фильтрата, титрование считается законченным. В кислой среде синяя лакмусовая бу­мажка окрашивается в красный цвет.

Содержание органических кислот (в мг на 100 г плодов и ово­щей) находят по формуле:

X = a×T×6,7×V1 /H×V2,

где а - количество 0,1 н. щелочи на титрование, см³; Т — титр 0,1 н. щелочи; Н — навеска исследуемого материала, мг; V₁ — общий объем вытяжки, см³ ; V₂— объем фильтрата на титрование, см³; 6,7 — коэффициент для перевода кислот на яблочную. Для выражения кислотности в процентах расчет проводят по формуле:

X = a×T×0,0067×V1 ×100 /H×V2

Обозначения те же, за исключением того, что навеска вещест­ва, взятого для анализа, дана в г [21].

Было рассмотрено влияние стимуляторов роста растений на содержание альдоз (глюкозы) в Eichornia crassipes. В качестве стимулятора роста использовалась янтарная кислота. Растения в одинаковом количестве и одновременно обрабатывались стимулятором, параллельно фиксировались контрольные образцы. Действие янтарной кислоты длилось 45 дней, после чего проводилось иодометрическое определение альдоз (глюкозы) по Вильштеру и Шудлю, колориметрическое измерение оптической плотности окрашенного раствора хлорофилла на ФЭКе в контрольных образцах и изучаемых.