1.1.4. Подготовка проб кормовых растений к анализу

Так как одной из поставленных целей исследования является доказательство утверждения об использовании зеленой массы анализируемого растения в качестве корма или добавки в комплексе с зимними кормами, то целесообразно отразить в обзоре литературы общую характеристику подготовки проб кормовых растений к анализу.

Среднюю пробу растений, взятую в поле в тот же день, об­рабатывают в зависимости от целен изучения и предполагаемых анализов. Для химической оценки высушенных образцов (сена) по общему содержанию химических веществ срезанные растения в виде снопов (лучше в капроновой сетке) подвешивают на укрепленных жердях в крытых помещениях. Когда растения до­стигнут воздушно-сухого состояния, их помещают в марлевые мешки. Применение марлевых мешков необходимо для того, что­бы предупредить потерн листьев высушенных растений. Однако часто необходимо знать содержание сухих веществ в листостебельной массе; в этом случае взвешивают пробы (снопы) перед сушкой и после высушивания до воздушно сухого состояния и, определив содержание влаги в сене, вычисляют в исходном образце содержание сухих веществ в процентах.

Для анализа отдельных органов растения их сразу разделяют на части (работу ведут в тени) и каждую часть высушивают в марлевом мешке; стебли при этом лучше разрезать на части.

Для оценки химического состава растений в свежем виде взятые образцы (пробы) немедленно измельчают и приступают к их обработке, направленной к прекращению деятельности фер­ментов. Под влиянием различных ферментов в срезанных расте­ниях происходит распад белковых веществ, полисахаридов и дру­гих соединений, что не позволяет получить правильного представ­ления о первоначальном химическом составе взятых образцов.

Для этого измельченные на стеблерезке или другим путем пробы помещают рыхлым слоем в кюветы (эмалированные) или алюминиевые пластины и прогревают в стерилизаторном шкафу и здесь же высушивают. Можно обрабатывать также паром, поместив листостебельную массу в алюминиевых ситах (диаметр 18-20 см) на 10-15 мин над кипящей водой в большую кастрюлю. После этого потерявшую тур гор листостебельную массу высушивают в термостате (с вентиляцией или без нее).

Высушенные до воздушно-сухого состояния пробы листостебельной массы перед размельчением до необходимого помола подсушивают в течение 3-4 часов при 45° и еще в теплом состоя­нии размельчают на мельнице или мясорубке до грубого помо­ла затем отделяют часть последнего и размельчают до более тонкого помола на мельнице типа «Пируэт». Измельченный ма­териал хранят в стеклянных банках с пробкой или в пакетах из поливиниловой пленки в эксикаторах [20].

1.2. Методы определения содержания углеводов в растениях

Содержание углеводов и их разнообразие определяется видом растения, фазой развития, абиотическими факторами среды и изменяются в широких пределах. Определение углеводов в растительной продукции позволяет: установить закономерности обмена этих веществ; оценить качество зеленой массы, плодов, овощей и возможность их технической переработки; В здравоохранении составить энергетический баланс, в зоотехнии рассчитать пищевой рацион [25].

Существуют количественные методы определения моносахаридов: химические, поляриметрические. Определение полисахаридов в растениях осуществляется теми же методами, но прежде кислородная связь этих соединений разрушается в процессе гидролиза [19, 22].

В некоторых источниках указывается на цианидный метод, который является быстрым, простым с точки зрения используемых реактивов и при соблю­дении рекомендуемой техники анализа дает вполне удовлетвори­тельные результаты. Метод используют для определения сахаров в овощах, плодах и корнеплодах. Он основан на способности железосинеродистого калия (красной кровяной соли) в щелочной среде окислять редуцирующие сахара. Реакцию осуществляют путем титрования раствором исследуемого сахара кипящего щелочного раствора железосинеродистого калия в присутствии метиленовой сини в качестве индикатора. Содержание моносахаров (редуцирующих Сахаров) вычисляю по количеству титрованного раствора железосинеродистого калия и объему израсходованного на его титрование раствора сахара неизвестной концентрации [21, 6].

В практике широко используется определение углеводов по Бертрану. Растворимые углеводы извлекаются из растительного материала горячей дистиллированной водой. В одной части фильтрата определяют моносахариды, в другой – после гидролиза соляной кислотой ди- и трисахариды, которые распадаются при этом до глюкозы. Метод основан на способности моносахаридов, содержащих альдегидную группу, восстанавливать феллингову жидкость [18, 21, 22].

Отдельные авторы в своих работах указывают на определение углеводов фотометрически с пикриновой кислотой (модификация Соловьева). Моносахариды, имеющие альдегидную или кетонную группировку, могут восстанавливать динитросоединения, при этом образуются интенсивно окрашенные соединения. Окраска пропорциональна количеству углеводов в реакции, поэтому возможно их колориметрическое определение. В этом случае используют реакцию восстановления пикриновой кислоты (2,4,6-тринитрофенола) в пикраминовую [20].

К. П. Петров приводит определение редуцирующих сахаров (по Офнеру). С целью упрощения метода Офнер для определения редуцирующих веществ предложил раствор, в состав которого входит медный купорос, сегнетовая соль и карбонат натрия. Таким образом, в этом растворе концентрация ионов гидроксила понижена по сравнению с реактивом фелинга, и поэтому раствор хорошо сохраняется. Редуцирующие сахара окисляются несколько медленнее, чем с раствором фелинга. Однако, используя этот метод, не надо отфильтровывать Сu2О, так как его количество легко определяется иодометрическим титрованием.

Иодометрическим методом определяют оставшийся невосстановленный нон Сu²⁺ или непосредственно Сu2О. При этом используют ту же обратимую реакцию, только равновесие должно быть смещено влево. Весь Сu2О, перед окислением иодом, переводят в раствор, прибавляя достаточное количество НСl. Избыток иода оттитровывают раствором тиосульфата натрия и, таким образом (по разности), определяют количество иода, связанного Сu2О [17].

Для измерения количественного содержания дисахаридов (сахарозы) удобнее всего использовать оптический метод. Он основан на способности сахарозы в водных растворах вращать плоскость поляризации световых лучей [21].