На каждом отпечатке должно быть проставлено его увеличение (разд. 10.6).

Рабочие отпечатки часто хранятся несмонтированными в конвертах или папках, однако те, которые предназначены для вывешивания на доску, обсуждения, преподавания или для публикации, после тщательного приведения в порядок должны быть смонтированы на картоне. Монтаж защитит отпечатки от повреждений и придаст им более привлекательный вид. Можно использовать обычную ткань с напыленным клеем, производя сухой монтаж под горячим прессом, или приклеивающиеся под давлением листы.

10.6. Определение и указание увеличения

Большинство исследователей считают, что если увеличение на микрографии приведено в виде числа, то это не слишком удобно. Когда нужно вычислить размеры представленного объекта, приходится измерять их на микрографии, а затем делить на увеличение, внимательно следя за тем, чтобы не ошибиться на несколько порядков. В случае проецируемых слайдов такие утверждения, как «увеличение здесь около 100», которые часто можно услышать, вообще лишены смысла, так как проектор увеличивает изображение в свою очередь раз в 50.

Гораздо лучше нанести на отпечаток масштабную линейку, так как с ее помощью можно сразу узнать, какой размер в изображении имеет, скажем, отрезок препарата в 100 мкм. К тому же длина нарисованной на фотографии линейки будет автоматически изменяться при увеличении или уменьшении изображения, например при подготовке его к публикации. Для слайдов полезно также указывать размер поля зрения.

Информация для нанесения масштабной линейки или величины поля зрения может быть легко получена с помощью одного дополнительного кадра — вам следует сфотографировать при * том же увеличении объектмикрометр, а затем отпечатать его изображение с тем же увеличением, что и остальные микрографии.

Отпечаток микрометра может служить «рулеткой» при измерении деталей изображения и основой для аккуратного нанесения масштабной линейки.

В случаях, когда необходимо указать увеличение на микрографии, его теперь чаще приводят в форме отношения типа «100:1», подобно тому как это делается на географических картах. Данная форма записи рекомендуется для всех реальных изображений с увеличением или уменьшением. Таким образом, увеличение объектива будет обозначаться аналогично, поскольку он создает действительное первичное изображение. Данный стиль предпочтительнее, чем обозначение типа «ХЮО», которое .на самом деле используется для обозначения углового увеличения при мнимом изображении. По этой же причине последний тип маркировки, например ХЮ, применяется для окуляров и увеличителей.

11. Практическое руководство

11.1. Получение микрографий с использованием 35-миллиметровой фотокамеры

1.Выберите пленку необходимой чувствительности: черно-белую, цветную слайдовую для дневного света или для лампы накаливания, цветную негативную и т. д.

2.Проверьте и очистите фотокамеру от пыли, обрывков пленки и т. д. и зарядите пленку.

3.Установите счетчик кадров, проверив, где это возможно, что кнопка обратной перемотки вращается, показывая тем самым протяжку пленки.

4.Установите на контрольной панели измерителя экспозиции чувствительность пленки (предварительно выбранную в результате пробной съемки).

5.Приготовьте бумагу для записей о каждом кадре.

6.Тщательно протрите стекло с препаратом.

7.Включите микроскоп, выберите объектив, поставьте препарат так, чтобы он заполнял рамку кадра, и установите освещение по Кёлеру.

8.Там, где это необходимо, убедитесь, что светоделительная призма введена, а все шторки открыты и свет может попасть в фотокамеру.

9.Расфокусируйте изображение препарата и установите окуляры или систему фокусировки камеры так, чтобы скрещенные линии (или другие метки) были хорошо видны в фокусе. Вновь наведите препарат на фокус.

10.При использовании цветной пленки установите ток накала лампы на предварительно выбранное значение и вставьте, если необходимо, светофильтр для коррекции цвета (разд. 8.3.3 и 8.3.4).

11.Рассмотрите распределение темных и светлых участков в кадре. Если оно отличается от «среднего», проводите измерение экспозиции в пятне или скорректируйте показания экспонометра. Экспозиция должна быть увеличена по сравнению с показаниями экспонометра, если вы имеете яркий фон, и уменьшена при темном фоне или при флуоресцентной микроскопии.

12.Прочтите показания экспонометра и убедитесь, что выдержка попадает в диапазон рабочих выдержек камеры (указанный в ее описании).

13.Если показанное экспонометром время экспозиции слишком мало, введите нейтральные светофильтры.

14.Тщательно сфокусируйте изображение. Проверьте установку фокуса конденсора, полевой и апертурной диафрагм.

15.Перемещая столик, слегка подвигайте препарат, наблюдая за ним в окуляры. Заметьте, не сохраняются

68

ли при этом неподвижными какие-либо детали. Их необходимо удалить, а если это невозможно, то постараться вывести из фокуса, слегка перемещая конденсор.

16.Вновь установите точный фокус; убедитесь, что столик и фокусировочный винт не дрейфуют.

17.Нажмите кнопку затвора и не прикасайтесь к микроскопу и столу во время экспозиции.

18.Перемотайте пленку, если это не производится автоматически.

19.Запишите использованную при съемке оптику и все детали, касающиеся препарата.

20.Для особо ценных микрографий повторите съемку после повторной фокусировки со слегка уменьшенной

ислегка увеличенной экспозицией.

21.Когда пленка кончится, перемотайте ее в кассету.

22.Проявите пленку как можно скорее.

11.2. Начальная калибровка экспонометра

В этом разделе инструкции даются на примере пленок и проявителей фирмы Kodak; аналогичная продукция других фирм также подходит для данных целей.

1.Установите в камеру пленку Kodak Technical Pan Film 2415.

2.Выберите хорошо окрашенный срез; настройте микроскоп оптимально для наблюдения в светлом поле, используя объектив 10, 25 или 40. Выберите участок, который занимает все поле зрения.

3.Удалите все цветные и нейтральные светофильтры из хода лучей.

4.Установите накал лампы так, чтобы вам было удобно смотреть, и отметьте показания на источнике питания (ток или напряжение). По возможности поддерживайте яркость на постоянном уровне во время всех работ по калибровке.

5.Установите чувствительность пленки на приборе 12 ед. ISO

или просто на самую низкую чувствительность, если на нем нет маркировки в ед. ISO.

6.Если ваш прибор показывает время экспозиции, то убедитесь, что оно не слишком велико или не слишком мало для него. Если это необходимо, измените накал лампы.

7.Сделайте серию снимков, устанавливая чувствительность последовательно на 12, 25, 50, 100, 200 и 400 ед. ISO, каждый раз тщательно записывая результаты. Если на приборе нет маркировки в единицах ISO, то воспользуйтесь большими делениями шкалы так, чтобы перекрыть ее всю шестью последовательными экспозициями.

8.Сфотографируйте один пустой кадр (без препарата).

9.Повторите этапы 5—8 для каждого цветного светофильтра, который может быть использован вами для усиления контраста.

10.Выньте пленку и проявите ее проявителем НС-110 в разведении D в течение 6 мин при 20 °С. Приготавливайте разведенный раствор, следуя инструкции на упаковке проявителя,

11.После того как пленка высохнет, просмотрите негативы и оцените их с точки зрения возможности печати. Если они вас устраивают, то напечатайте их (или отдайте напечатать) и затем проанализируйте. Выберите оптимальные условия для работы с различными светофильтрами и без них.

12.Перенесите номера кадров на пленке в свои записи (ваш первый отснятый кадр может не быть первым на пленке) и запишите пояснения к каждому кадру.

Изложенную процедуру можно затем повторить с пленкой Technical Pan, проявленной с целью получения более низкого контраста жидким проявителем Technidol в течение 9 мин при 20 °С, а для получения более высокого контраста — проявителем D19 в течение 4 мин при 20 °С. Если это необходимо, следует повторить процедуры с другими типами изображений и препаратов, которые используются в вашей лабораторной работе.

11.3. Начальная калибровка системы без экспонометра

Проделайте этапы 1—4 из разд. 11.1, тщательно записывая все, что касается настройки оборудования, так чтобы все условия работы могли быть потом точно воспроизведены.

5.Установите затвор камеры на выдержку 1 с и снимите один кадр.

6.Повторите съемку, последовательно уменьшая выдержку вдвое до 1/1000 с (или до минимума, которого позволяет достичь ваша камера) и каждый раз записывая экспозицию.

7.Снимите один пустой кадр (без препарата).

в. Повторите этапы 5—7 для каждого объектива и выбранных цветных фильтров. 9. Следуйте инструкции в разд. 11.2, начиная с этапа 10 до конца.

Работа без экспонометра утомительна и ненадежна. Она, по-видимому, приемлема только в тех случаях, когда требуются повторные микрографии одного и того же препарата в очень близких условиях.

11.4. Получение правильной цветопередачи на слайдах

1. Выберите пленку и зарядите ее в камеру. Для начала выберите пленку для искусственного света с малой или средней чувствительностью, например Ektachrome 50 Professional для лампы накаливания (50 ед. ISO) или

Ektachrome 160 (160 ед. ISO), обе сбалансированные для 3200 К, либо Fujichrome 64 Т (64 ед. ISO),

сбалансированную для 3100 К.

69