Лекции по биофизике
.pdf
Схема хемилюминометра
Свето-непроницаемый кожух
Фотоумножитель
Сосуд Дьюара
Предусилитель
Жидкий азот
шторка
Усилитель
Счетчик импульсов
Кюветное отделение
Измерительная ячейка
Современная установка для измерения ХЛ
|
|
Аналого- |
|
мешалка |
Цифровой |
|
Преобразователь |
|
|
|
|
|
PowerLab |
|
|
кювета |
|
|
термостат |
Компьютер |
|
|
|
|
Светонепроницаемый |
|
|
кожух |
|
ФЭУ |
шторка |
|
|
|
|
|
Кинетика перекисного окисления липидов |
|
||||||||
|
|
|
|
|
ЛП |
МВ |
СС |
БВ |
МВ |
СС |
|
|
50 |
|
20 |
|
|
|
|
|
ЛП |
|
|
) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
белка |
40 |
Ед.) |
16 |
|
Fe2+ |
|
|
|
|
ТБКАП |
|
ТБКАП (нмоль/мг |
|
Fe2+(мМ); CL (отн. |
|
|
|
|
|
|
|
||
30 |
12 |
|
|
|
|
|
|
|
|
||
20 |
8 |
|
|
|
|
|
|
|
|
||
10 |
4 |
|
|
|
Fe |
2+ |
|
ХЛ |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
0 |
|
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
15 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
9 |
21 |
|
27 |
|
33 |
39 |
|
|
Владимиров, А., Т.Б. Суслова, and В.И. Оленев, Хемилюминесценция, сопряженная с |
||||||||||
образованием липидных перекисей в биологических мембранах. П. Роль Fe(2+) в разитии |
|||||||||||
|
цепного окисления липидов и сверхслабого свечения. Биофизика, 1969. 14: p. 836-845 |
||||||||||
Кинетика перекисного окисления липидов
ТБКАП (нмоль/мг белка )
50
40
30
20
10
0
Fe2+(мМ); CL (отн. Ед.)
20
16
12
8
4
0
БВ МВ СС 
ЛП
ТБКАП
Fe2+ |
ХЛ |
3 |
9 |
15 |
21 |
БВ – быстрая вспышка; ЛП – латентный период; МВ – медленная вспышка; СС – стационарное свечение
Эксперимент для изучения роли кислорода в ПОЛ
Fe2+ |
LOOH |
ФЭУ |
ФЭУ |
Хемилюминесценция при ПОЛ, индуцированном ионами
Fe2+
Олеиновая кислота |
|
Митохондрии |
-O2 |
|
+O2 |
|
-O2 |
|
+O2 |
Fe2+ |
Fe2+ |
Fe2+ |
Fe2+ |
Реакции ПОЛ, протекающие в присутствии и в отсутствие О2
Без кислорода:
Fe2+ + LOOH Fe3+ + LO LO + LH LOH + L
L + L
LO + LO
L + LO
I = k6[LOO ]2
В присутствии кислорода:
Fe2+ + LOOH Fe3+ + LO LO + LH LOH + L
L + O2 LOO L + L
LO + LO
LOO + LOO L=O* LO + hν L + LO
LO + LOO
L + LOO
= 10-9 ÷ 10-15
|
Роль ионов Fe в |
|||
|
инициировании ПОЛ |
|||
ед. |
200 |
|
|
Контроль |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
отн. |
150 |
|
|
|
ХЛ, |
|
|
|
|
Интенсивность |
100 |
|
|
|
50 |
|
|
+ ЭДТА |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
0 |
40 |
80 |
120 |
|
|
Время, мин |
|
|
Кинетика ХЛ (быстрая вспышка) при различных [Fe2+]
Интенсивность ХЛ, отн. ед.
140
3500 μM
120
100
350 μM
80
60
35 μM
40
20
0
0 |
0.6 |
1.2 |
1.8 |
2.4 |
|
|
Время, сек |
|
|
Программа для моделирования кинетики KineticAnalyzer
Добавление
реагентов
Добавление
продуктов
Концентрации
Указание констант скорости
Авторы Д.Ю. Измайлов и Ю.А. Владимиров