Работа № 1. Получение раствора амилазы слюны.

Перед началом выполнения опыта прополоскать тщательно полость рта дистиллированной водой.!

Ход работы:

В мерный стакан наливают 10 мл дистиллированной воды. Воду помещают в полость рта, выдерживают 2 мин. и полученный раствор слюны переносят вновь в мерный стакан (в норме скорость выделения слюны равна 0,4-0,6 мл/мин). Полученный раствор слюны в разведении примерно 1: 10 используют в последующих исследованиях.

Клиническое значение работы. Предложенный способ ­– один из простых и распространенных для получения ферментов смешанной слюны в водном растворе, если речь идет о качественных исследованиях. Для количественных исследований сначала получают неразбавленную смешанную слюну.

Работа № 2. Обнаружение специфичности фермента амилазы.

Принцип метода: α- Амилаза гидролизует α-гликозидные связи в крахмале и не гидролизует гликозидную связь в сахарозе. Продукты гидролиза обнаруживают с помощью качественной реакции.

Ход работы:

1. В две пробирки помещают по 1 мл раствора слюны.

2. В одну пробирку добавляют 1 мл раствора крахмала, в другую - 1 мл раствора сахарозы.

3. Обе пробирки помещают на 10 мин в термостат при Т = 40 С.

4. Содержимое каждой пробирки используют для проведения качественной реакции с реактивом Фелинга.

Задание к работе

1. Опишите наблюдаемые явления.

2. Запишите в тетради структурные формулы сахарозы и амилопектина (фракции крахмала). Определите типы гликозидных связей, сравните химический состав.

3. Какие связи гидролизуются α- амилазой?

4.Запишите уравнение реакции с реактивом Фелинга. Какое химическое соединение определили?

5. Сделайте вывод, в чем заключается проявление специфичности амилазы.

Медико- биологическое значение.

Специфичность ферментов лежит в основе обнаружения фермента в биологической жидкости (кровь, слюна, моча), в гомогенате ткани, клеточной органелле, используется для определения активности фермента (обычно по скорости превращения субстрата, специфичного к ферменту).

Работа № 3. Влияние величины рН на активность фермента.

Принцип метода: исследуют активность фермента в растворах субстрата при различных значениях рН.

Ход работы:

1. В три пронумерованные пробирки наливают по 1 мл буферных растворов со значениями рН =4.0; 7.0; 10.0 (1мл раствора в одну пробирку).

2. В каждую пробирку добавляют по 2 мл раствора крахмала и по I мл раствора слюны.

3. Пробирки помещают в термостат при Т= 40°С на 10 мин.

4. Через 10 мин в каждую пробирку добавляют по 1-2 капли раствора йода.

Задание к работе: 1. Опишите наблюдаемые явления после добавления йода. 2. Сделайте вывод об оптимальной среде для фермента амилазы, сравните с величиной рН слюны в норме. 3. Сравните опытные данные, полученные у других исследователей в группе. Имеется ли полное совпадение результатов? Сделайте вывод по итогам сравнения.

Медико-биологическое значение

Знание оптимальной величины рН необходимо:

1. для создания методик определения активности ферментов;

2. для прогнозирования изменения активности ферментов при нарушении буферных свойств биологических жидкостей организма (кровь, слюна) внутриклеточной среды, изменении кислотности секретов (желудочный сок, желчь).