ИНСТРУКЦИЯ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ
ТЕМА: «СЕМЕЙСТВО КИШЕЧНЫХ БАКТЕРИЙ»
ЦЕЛИ:
Изучить методы выявления сальмонелл.
Ознакомиться с особенностями лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифов.
Изучить особенности лабораторной диагностики острых гастроэнтеритов.
Закрепить навык работы с микроскопом.
Задание № 1 Методы выявления сальмонелл
При заболеваниях, вызванных сальмонеллами в лабораторию доставляется, следующий материал: кровь, испражнения, моча, желчь.
Брюшной тиф и паратифы – острые инфекционные заболевания, сопровождающиеся бактериемией, общей интоксикацией, поражением лимфатического аппарата тонкого кишечника, которые можно дифференцировать только с помощью бактериологических и иммунологических исследований. При этом брюшной тиф вызывается Salmonella typhi, паратифы А и В S. paratyphi А и В. Дифференцировать их по морфологическим признакам невозможно. Они, как и другие виды многочисленного семейства энтеробактерий (эшерихии, шигеллы, возбудители сальмонеллезов) представляют собой беспоровые и бескапсульные грамотрицательные палочки с закругленными концами размером 1,5-3,0 х 0,5 мкм.
Основными методами лабораторной диагностики тифопаратифов являются выделение гемокультуры сальмонелл, положительная реакция агглютинации Видаля и в более поздние сроки заболеваний – выделение копро- и уринокультур.
Впервые дни болезни и весь лихорадочный период высевают кровь для выделения гемокультуры. В начале второй недели с целью обнаружения агглютининов берут кровь для реакции Видаля. В конце второй – третьей неделе и позже из испражнений и мочи пытаются выделить копро- и уринокультуру сальмонелл.
Задание № 2 Ознакомиться с особенностями лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифов
Лабораторная диагностика тифопаратифов основана на определении:
Видовой принадлежности чистых культур.
Титра антител к ним в сыворотке больных и реконвалесцентов.
Подготовительный этап:
Подготовить рабочее место согласно правил работы в бактериологической лаборатории.
Подготовить емкости с дез. растворами для обеззараживания предметов, используемых в процессе работы, согласно инструкции.
В первые 2 недели заболевания, когда у больных отмечается интенсивная бактериемия, культуру сальмонелл выделяют из крови, реже – из пунктатов костного мозга и соскоба розеол; на 3-4 неделе и позже, когда они проникают в почки, желчный пузырь и кишечник – из мочи, желчи и фекалий. При этом выделенные из них культуры соответственно называют гемо-, миело-, розеоло-, урино-, били- и копрокультурами.
Основной этап:
Каждую из данных культур получают и иденфицируют в течение 3-4 суток. При этом гемо-, миело- и розеолокультуры выделяют путем засева соответствующих патологических материалов на 10 % желчный бульон или среду Рапопорта – Вайнтрауба (желчный бульон с 1 % маннитом или 2 % глюкозой, 1 % индикатор Андраде и поплавком для удавливания газа), а урино-, копро- и биликультуры – на среды Плоскирева, Эндо, висмут-сульфитный агар.
Выделение гемокультуры. Гемокультуру удается выделить на высоте бактериемии. Для этого в первые дни лихорадочного периода берут 5-10 мл крови, на второй и третьей неделе 15-20 мл крови. Взятые объемы крови засевают на желчный бульон и среду Рапопорта – Вайнтрауба в соотношениях 1:10, что резко сниэает микробоцидные свойства гуморальных факторов исследуемой сыворотки крови. Посевы помещают в термостат при 370С на одни сутки. При размножении сальмонелл в желчном бульоне видимых невооруженным глазом изменений среды не происходит, а среда Рапопорта – Вайнтрауба краснеет в результате ферментации маннита (глюкозы); в поплавке при росте параифозных бактерий накапливается газ. Обнаружив в мазках и раздавленной капле из желчных бульонов грамотрицательные подвижные бактерии культуры отсевают на среду Плоскирева для получения отдельных колоний и на среду Олькеницкого – для предварительного учета основных биохимических свойств сальмонелл. Через 18-24 часа инкубации в термостате производят повторные микроскопические исследования лактозоотрицательных колоний на среде Эндо и культуры, выросшей на среде Олькеницкого, после чего культура типируется при помощи реакции агглютинации в групповых и монорецепторных сальмонеллезных О- и Н- сыворотках, что позволяет определить в начале родовую, а затем видовую принадлежность возбудителя.
Миело – розеолокультуру получают на тех же желчных бульонах, а били-, копро- и уринокультуры – путем засева дуоденальной желчи, фекалий и осадков мочи после центрифугирования на дифференциально-диагностические и селективные среды. Видовую принадлежность всех этих культур устанавливают с использованием тех же приемов идентификации, как и гемокультуры.
Серологическое исследование. Высокий титр антител в крови больных тифопаратифами регистрируется на 5-7сутки. В разгаре заболевания бурно образуются О-антитела. Их выделяют с помощью стандартных – О диагностикумов сальмонелл брюшного тифа и паратифов в реакции Видаля. Для ее постановки берут 2—3 мл крови из локтевой вены или 1 мл из пальца, мочки уха у детей и, получив из нее сыворотку, последовательно разводят в нескольких параллельных рядах пробирок 1:100 до 1:1600 внося в пробирки первого ряда брюшнотифозный, паратифозные А, В, О – диагностикумы, а в остальные такие же О-диагностикумы подвидов сальмонелл, вызываемых острые гастроэнтериты. Штатив с пробирками ставят в термостат через 2 часа производят учет реакции по наличию в сыворотках осадков. Диагностическое значение имеют титры 1:200. при меньших титрах, которые могут регистрироваться у привитых против тифапаротифов, реакцию Видаля ставят повторно через 3-4 дня. У больных титр реакции нарастает, у привитых – остается прежним.
Определенное значение в серодиагностике придает выделению в сыворотке больных Н агглютининов, которые вырабатываются в конце заболевания и Vi агглютининов – у реконвалесцентов. Для их обнаружения готовят Н и Vi диагностикумы, обрабатывая сальмонеллы формалином (Н и этанолом Vi).
ЗАДАНИЕ № 3 Особенности лабораторной диагностики острых энтеритов
При острых гастроэнтеритах, вызванных сальмонеллами в лабораторию доставляется следующий материал: испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь, мясные и молочные продукты, остатки пищи, соскобы со столов, разделочных досок, смывы с рук обслуживающего персонала. Основным методом лабораторной диагностики сальмонеллезов является выделение чистой культуры сальмонелл и ее идентификация.
Бактериологическое исследование. Различные материалы засевают на среды Плоскирева (кровь – на желчной бульон). Посевы помещают в термостат. Через 6-10 часов бульонную гемокультуру пересевают на среду Плоскирева, а выросшие на ней через 18-24 часа бесцветные колонии на среду Олькеницкого. На третьи сутки чистую культуру засевают на пестрый ряд Гиса. На четвертые сутки определяют ферментативные свойства сальмонелл на средах Гиса.
Серологическое исследование. Ставится реакция Видаля (см.выше).
ЗАСЕДАНИЕ № 4 Закрепить навык работы с микроскопом
Заключительный этап:
Дезинфекция и уборка рабочего места.
Дезинфекция и мытье рук.
Контрольные вопросы:
Какие заболевания у человека вызывают сальмонеллы? Какие материалы подлежат бактериологическому исследованию?
Ферментативные свойства сальмонелл, брюшного тифа и паратифов А и В.
Метод выделения гемокультуры и ее идентификация.
Метод выделения миелокультуры и ее идентификация.
Метод выделения розеокультуры и ее идентификация.
Техника постановки реакции Видаля и ее диагностические титры.
Выявление бактерионосительства при брюшном тифе.
Техника посева крови на гемокультуру.
Метод выделения уринокультуры и ее идентификация.
Метод выделения капрокультуры и ее идентификация.
Особенности лабораторной диагностики острых сальмонеллезных гастроэнтеритов.
ЗАДАЧА № 1
2-х месячному ребенку, находящемуся на смешанном вскармливании выставлен диагноз «колиэнтерит».
Какой патологический материал следует взять?
Какими методами можно исследовать взятый материал?
ЗАДАЧА № 2
Из патологического материала больного человека (испражнения) выделен возбудитель имеющий вид палочки с закругленными концами грамм- и неподвижной.
ЗАДАЧА № 3
Из смывов рук взятых у работников столовой одной из школ обнаружены грамотрицательные палочки в большом количестве.
Какое исследование предстоит провести, чтобы определить их принадлежность?