Факторы, влияющие на клональное микроразмножение.

Пита­тельная среда. Состав питательной среды — один из наиболее важ­ных факторов при микроразмножении. Обычно используют стан­дартные среды: Мурасиге-Скуга, Нича и др., но с добавлением на каждом этапе различных веществ. На первом этапе в питатель­ную среду часто вносят антиоксиданты, чтобы предотвратить ги­бель клеток из-за активизации гидролитических ферментов. Осо­бое значение имеют концентрация и соотношение фитогормонов в среде. Например, на втором этапе для усиления морфогенеза обычно добавляют цитокинины. Напротив, на третьем этапе при укоренении в питательной среде должно быть только небольшое количество ауксинов (либо используется безгормональная среда). Иногда в среду добавляют гиббереллин (ГК), который стимули­рует рост сформировавшихся почек. Важным регуляторным фак­тором служит сахароза. Обычная концентрация ее в среде состав­ляет 3 %. На растениях каперса было показано, что более высокая концентрация сахарозы в среде приводила к образованию пур­пурных, содержащих антоциан, почек возобновления. При кон­центрациях сахарозы менее 3 % наблюдалось формирование зеле­ных почек, способных к размножению.(75)

Кроме того, существенное значение имеет состояние среды. Например, культивирование меристем земляники, вишни, чер­ной смородины лучше происходит в жидкой питательной среде, чем в агаризованной.

Состояние экспланта. Морфогенез в значительной мере опре­деляется возрастом и размером экспланта. Так, у эхеверии экспланты из молодых листьев образуют корни, из старых листьев — побеги. И только у листьев среднего возраста возникают и побеги, и корни, т.е. появляется возможность регенерации целого расте­ния. Размер экспланта прямо пропорционально связан с регенерационной способностью: чем крупнее эксплант, тем выше эта спо­собность. Большие экспланты могут самопроизвольно независимо от соотношения в питательной среде ауксинов и цитокининов об­разовывать почки. Но увеличение размера может привести к нега­тивным последствиям, так как появляется вероятность присутствия в экспланте клеток, содержащих вирусную, грибковую и другие виды инфекции. Оптимальная величина экспланта должна обеспе­чивать как активный морфогенез, так и полную стерильность.(73)

На регенерационную способность экспланта влияют также физиологическое состояние и таксономическая принадлежность растения-донора. Например, экспланты, выделенные из растений в фазу покоя, обладают более низкой способностью к укорене­нию и развитию побегов по сравнению с эксплантами, изолиро­ванными в фазу активного роста. Двудольные травянистые расте­ния характеризуются большей регенерационной способностью, чем однодольные.(70)

Физические факторы. Большое значение для успешного клонального размножения имеют физические факторы — температура, условия освещения, качество света, влажность.(45)

Для улучшения клонального микроразмножения физические факторы необходимо подбирать с учетом естественного ареала произрастания культивируемого растения. Так, для тропических растений оптимальная температура культивирования будет при­ближаться к 27 °С, для растений альпийских лугов — к 18 —20 °С, для большинства растений — к 25 °С. Жизнеспособность эксплан- тов увеличивается, если в начале выращивания поддерживать бо­лее низкие температуры. Оптимальная интенсивность освещения для большинства растений составляет 1000 — 3000 л к в течение 14—16 ч в сутки.(40)

Существенное значение для регуляции морфогенеза имеет каче­ство света. У микрочеренков березы красный свет способствовал 100 %-му укоренению, а синий — увеличивал содержание ЦК в тканях растений и таким образом стимулировал образование по­бегов.(38)

Относительная влажность в камерах, где растут пробирочные растения, поддерживается на уровне 65—75 %. При пересадке в почву эти растения нуждаются в повышенной влажности, что при выра­щивании в камерах достигается созданием атмосферы «тумана».