Количественное определение гемоглобина в крови гемоглобинцианидным методом

Задание 1. Определить содержание гемоглобина в крови гемоглобинцианидным методом.

Принцип. Гемоглобин крови при взаимодействии с железосинеродистим калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин.

Ход работы. К 5 мл трансформирующего раствора прибавляют 0,02 мл крови (разведение в 25 раз), хорошо перемешивают. Определение проводят через 10 мин против холостой пробы (трансформирующего раствора). Определяют оптическую плотность на спектрофотометре при 540 нм в 1 см кювете. Содержание гемоглобина (Х) в г/л рассчитывают по формуле:

Х= D₅₄₀ × 367,7. При фотометрировании определение проводят в диапазоне волн 500-560 нм (зеленый светофильтр). Эталонный раствор гемоглобина готовят так же, как и пробу цельной крови. Расчет содержания гемоглобина (В) в г/л проводят по формуле: В=(D_оп.×120)/D_эт., где D_оп. – оптическая плотность опытной пробы; D_эт. - оптическая плотность эталонной пробы; 120 - содержание гемоглобина в эталонном растворе (г/л).

Клинико-диагностическое значение. В норме содержание гемоглобина в крови для мужчин составляет 130-160 г/л, для женщин – 120-140 г/л. Определение содержания гемоглобина – необходимый этап диагностики разных заболеваний. Повышение гемоглобина в крови может быть связано со следующими состояниями: 1) заболевания, при которых повышается уровень эритроцитов; 2) повышение кислородной ёмкости крови, вызванное гипоксией при сердечно-сосудистой патологии; проживании в высокогорных районах; ожирении, курении и образовании неактивного гемоглобина; 3) обезвоживание организма; 4) стресс и высокие физические нагрузки; 5) новообразования в почках, печени, ЦНС, яичниках; нарушение функции сосудов; 6) нарушение гормонального уровня (повышение кортикостероидов или андрогенов); 7) химические отравления угарным газом, нитратами или лекарствами; 8) ожоги. Снижение гемоглобина в крови может быть следствием: 1) кровотечений; 2) снижения уровня эритроцитов при разных видах анемий (дефицит витаминов В₁₂ и В₉; дефицит витамина С; нехватка железа; интоксикации или нарушение работы почек; нарушение созревания эритроцитов). Снижение гемоглобина могут вызывать разнообразные факторы: неполноценное питание; нарушение работы желудочно-кишечного тракта; употребление большого количества чая, кофе и других продуктов, тормозящих всасывание железа.

Литература

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – С. 263-269, 419-423.

2. Губський Ю.І. Біологічна хімія. Підручник. – Київ-Вінниця: Нова книга, 2007. – С. 317-323, 502-507.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини: Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – С. 553-562.

4. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 78-85, 503-506.

5. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. – С. 636-645.

6. Практикум з біологічної хімії / Бойків Д.П., Іванків О.Л., Коби-лянська Л.І. та ін./ За ред. О.Я. Склярова. – К.: Здоров’я, 2002. – С. 255-262.