- •Модуль 4 обмен белков и нуклеиновых кислот занятие 1
- •Анализ желудочного сока
- •Література
- •Занятие 2
- •Количественное определение гистамина в крови по методу н.В. Климинкиной и с.И. Плитмана
- •Література
- •Определение активности аспартатаминотрансферазы (АсАт) в сыворотке крови по Кингу
- •Література
- •Занятие 4
- •Количественное определение мочевины и аммиака в биологических жидкостях
- •Литература
- •Занятие 5
- •Литература
- •Занятие 6
- •Определение содержания креатинина в биологических жидкостях
- •Литература
- •Занятие 7
- •Определение содержания мочевой кислоты в биологических жидкостях по методу Мюллера и Зейферта. Определение общего азота в моче по методу Кьельдаля.
- •Литература
- •Занятие 8
- •Литература
- •Занятие 9
- •Перечень вопросов к итоговому модульному контролю № 4
Определение содержания креатинина в биологических жидкостях
Задание 1. Определить содержание креатинина в сыворотке крови.
Принцип. Креатинин при взаимодействии с пикриновой кислотой в щелочной среде образует соединение оранжево-красного цвета, интенсивность которого определяют фотометрически.
Ход работы. Опытная проба - вносят 0,5 мл сыворотки крови, 1 мл дистиллированной воды и 0,5 мл трихлоруксусной кислоты; калибровочная проба (эталонная) - вносят 0,5 мл калибровочного раствора (концентрация креатинина - 177 мкмоль/л), 1 мл дистиллированной воды и 0,5 мл трихлоруксусной кислоты. Содержимое обеих пробирок перемешивают, оставляют стоять 5 мин, затем центрифугируют при 2500-3000 об/мин на протяжении 5 мин. Надосадочную жидкость сливают. В две центрифужные пробирки вносят по 1 мл надосадочной жидкости из каждой пробы, прибавляют по 0,5 мл пикриновой кислоты (0,04 моль/л) и 0,5 мл NaOH (0,75 моль/л). Перемешивают и точно через 20 мин фотометрируют в 1 см кювете при 505 нм против раствора сравнения. Раствор сравнения: в центрифужную пробирку вносят 1,5 мл дистиллированной воды и 0,5 мл трихлоруксусной кислоты; перемешивают. Из этого раствора берут 1 мл и переносят в отдельную пробирку, прибавляют 0,5 мл пикриновой кислоты и 0,5 мл натрия гидроксида.
Концентрацию креатинина (Х) в мкмоль/л в сыворотке крови рассчитывают по формуле: Х=(Сэт.×Еоп.)/Еэт., где Сэт. - концентрация креатинина в эталонной пробе (177 мкмоль/л); Еоп. - оптическая плотность опытной пробы; Еэт. - оптическая плотность эталонной пробы. В норме содержание креатинина в сыворотке крови (натощак) составляет: для мужчин - 61-115 мкмоль/л, женщин - 53-97 мкмоль/л.
Внимание! При работе необходимо строго придерживаться правил работы с отравляющими веществами в химических лабораториях, так как пикриновая кислота - яд, а трихлоруксусная кислота и NaOH - едкие вещества!
Задание 2. Определить содержание креатинина в моче.
Принцип. Тот же.
Ход работы. Определение проводят в центрифужных пробирках, которые заполняют в соответствии со схемой:
|
Опытная проба |
Раствор сравнения |
Моча разбавленная 1:100 (мл) |
0,5 |
- |
Вода дистиллированная (мл) |
0,25 |
0,75 |
Трихлоруксусная кислота (мл) |
0,25 |
0,25 |
Пикриновая кислота (мл) |
0,5 |
0,5 |
NaOH (мл) |
0,5 |
0,5 |
Перемешивают содержимое пробирок и точно через 20 мин измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной пробы против раствора сравнения в 1 см кювете при 505 нм. Эталонный (калибровочный) раствор готовят как и в случае определения креатинина в сыворотке крови. Количество креатинина (У) в ммоль/сут в моче рассчитывают по формуле:
У=(Сэт.×Еоп.×Д×50)/(Еэт.×1000), где Сэт. - концентрация креатинина в эталонной пробе (177 мкмоль/л); Еоп. - оптическая плотность опытной пробы; Еэт. - оптическая плотность эталонной пробы; Д - суточный диурез (1,5 л); 1000 - перевод мкмоль в ммоль; 50 - разведение мочи. В норме содержание креатинина в моче составляет: для мужчин - 8,8-17,7 ммоль/сут (1,0-2,0 г); женщин - 7,1-15,9 ммоль/сут (0,8-1,8 г).
Клинико-диагностическое значение. Концентрация креатинина в сыворотке крови здоровых людей относительно постоянная в результате строгой зависимости между его образованием и выделением. Креатинин относится к беспороговым веществам, он фильтруется только клубочками, но не реабсорбируется. Секреция креатинина канальцами возможна только при высокой концентрации его в крови. Определение креатинина для оценки клубочковой фильтрации обусловлено тем, что его концентрация в плазме обратно пропорциональна клиренсу при постоянных условиях выделения и концентрирования. Критической верхней границей установлена концентрация креатинина на уровне 115 мкмоль/л. Уровень креатинина в сыворотке повышается при ретенционных азотемиях. По нарастанию его концентрации в крови определяют степень хронической почечной недостаточности. Количество выделенного с мочой креатинина прямо зависит от содержания фосфокреатинина в мышцах. Количество креатинина в моче будет изменяться также и в зависимости от содержания креатинина в пище (его много в мясных продуктах). Повышенной экскрецией креатинина (гиперкреатинурия) сопровождаются лихорадочные состояния, острые инфекционные заболевания, сахарный и несахарный диабет. Креатинурия свидетельствует о патологии поперечно-полосатых мышц (мышечная дистрофия, атрофия, миастения). Гипокреатинурия наблюдается при заболеваниях почек, а именно - при хроническом нефрите, мышечной атрофии, после перенесенных инфекций, в преклонном возрасте и при алиментарной дистрофии.