Тема: Щелочно-кислотное равновесие. Биохимия мочи.

ЦЕЛЬ: Знать физико-химические свойства и физиологические механизмы регуляции щелочно-кислотного равновесия, его нарушения и патологические компоненты мочи. Уметь провести общий анализ мочи и исследование некоторых показателей щелочно-кислотного равновесия и правильно интерпретировать полученные результаты.

ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ.

1. Понятие об изогидрии. Физико-химические и физиологические механизмы регуляции рН крови.

2. Показатели щелочно-кислотного равновесия.

3. Метаболический, газовый, компенсированный, некомпенсированный ацидоз и алкалоз. Виды метаболических ацидозов.

4. Физико-химические свойства мочи.

5. Нормальные составные части мочи (органические и неорганические).

6. Патологические компоненты мочи: белок, сахар, кровь, желчные пигменты, кетоновые тела. Причины их появления в моче.

7. Регуляция водно-солевого обмена. Строение и механизм действия вазопрессина и альдостерона.

8. Ренин-ангиотензионовая система. Биохимический механизм развития почечной гипертензии.

Лабораторные работы.

Работа №1. Определение рН мочи. Порядок выполнения работы. На середину индикаторной бумаги “Рифан” наносят 1-2 капли исследуемой мочи и по изменению цвета одной из окрашенных полосок, совпадающему с окраской контрольной полосы, устанавливают рН исследуемой мочи. В норме рН мочи 5,0-7,0.

Работа №2. Определение белка в моче.

1. Проба кипячением. Пробирку с 20 каплями патологической мочи нагревают до кипения. Образовавшийся осадок – представляет собой белок и фосфаты. К горячему раствору добавляют 1-3 капли 1% р-ра уксусной кислоты. Если при подкислении осадок растворяется, значит он обусловлен фосфатами, если нет – белками мочи.

2. Проба Геллера. В сухую пробирку осторожно по стенке наливают 10 кап конц. НNО₃ и затем наслаивают 10 кап исследуемой мочи. Пробирку не встряхивают! При положительной пробе на границе двух жидкостей появляется белое кольцо.

3. Количественное определение белка методом разведения (метод Брандеберга – Робертса – Стольникова). Метод основан на образовании тонкого кольца осадка белка при наслоении мочи на азотную кислоту. Если образование кольца происходит между второй и третьей минутами, то в моче содержится приблизительно 0,033 г/л белка. Поэтому готовят порции мочи с разведением в 2, 4, 8, 16, 32 раза. Берут 5 пробирок и наливают в каждую по 1 мл 50% р-ра НNО₃. Затем осторожно, по стенке, наслаивают такое же количество мочи различного разведения. Отмечают, в какой пробирке между второй и третьей минутами появилось белковое кольцо. Степень разведения мочи в этой пробирке умножают на 0,033, получают содержание белка в моче.

Работа №3. Качественная реакция на сахар в моче.

1.Проба Гайнеса: К 10 каплям исследуемой мочи прибавляют 3 мл реактива Гайнеса, нагревают смесь до кипения. При положительной реакции появляется кирпично-красного цвета осадок закиси меди.

2.Определение глюкозы в моче с помощью глюкотеста.

Порядок выполнения работы: В исследуемую мочу погружают полоску глюкотеста так, чтобы желтая полоса, имеющаяся на полоске, была полностью смочена. Быстро извлекают бумажку из исследуемой мочи и выдерживают 2 минуты. В случае присутствия глюкозы в моче желтая полоса окрашивается в различные оттенки зеленого цвета в зависимости от концентрации глюкозы; при отсутствии глюкозы цвет полоски не меняется.

Работа №4. Качественное определение кетоновых тел в моче (проба Либена). Порядок выполнения работы: К 5 каплям мочи добавить 1 каплю 10% р-ра едкого натра и 4-5 кап р-ра Люголя. При наличии ацетона появляется запах йодоформа и бледно-желтый осадок.

Работа №5. Качественное определение кровяных пигментов в моче (бензидиновая проба). Порядок выполнения работы: В пробирку берут 20 капель мочи, кипятят и затем охлаждают. Добавляют 20 капель бензидина в уксусной кислоте и 4 капли перекиси водорода. При наличии кровяных пигментов моча окрашивается в синий или зеленый цвет.

Работа №6. Качественное определение желчных пигментов в моче (проба Гмелина). Порядок выполнения работы: К 10 каплям конц НNО₃ осторожно по стенке пробирки (не встряхивая!) добавляют 10 капель мочи. На границе 2-х жидкостей появляются различно окрашенные кольца: зеленое, синее, фиолетовое, красное и желтое.

Работа №7. Решение задач. Каждый студент получает пробирку с мочой (патология не известна) и приводит ее общий анализ (работы №1-6). В протоколе указывает: номер задачи и результаты анализа мочи - цвет, прозрачность, рН, наличие или отсутствие патологических компонентов, а в заключении делает общий вывод о патологии.

ЛИТЕРАТУРА ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ. Основная:

1. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник. – 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2002, с. 586-599, 608-624.

2. Биохимия: Учебник/Под ред. Е.С. Северина. –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003, (Серия XXI век), с. 597-604, 754, 756-758.

3. Николаев А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2001, с. 358-368, 433-437.

4. Лекционный материал.

Дополнительная:

1. Бородин Е.А. ‘‘Биохимический диагноз’’, часть 1, Благовещенск, 1991.

2. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. ‘‘Биохимия для врача’’, Екатеринбург, 1994.

3. Клиническая биохимия /Под ред. В.А. Ткачука –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. -360 с. –(Серия XXI век)

4. Клиническая биохимия /Пер. с англ. –М. –СПб.: «Издательство Бином» - «Невский Диалект» 1999. -368 с., ил.

5. Марри Р. и соавтор. ‘‘Биохимия человека’’ М.: Мир, 1993, т. 1.