Изучение уровня липопероксидного окисления, антиоксидантной активности и содержания трансферина и церулоплазмина в плазме крови собак под влиянием Оксина.

О.Т. Касаткина, И.Ф. Русина, Т.Е. Сирота, Л.Н. Шишкина, К.А. Юров, В.Л. Шарыгин, М.К. Пулатова, С.П. Ярмоненко. Институт химической физики Российской академии наук, Москва. Онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва.

Цель работы.

Установить характеристики антиоксидантных (АО) свойств ряда препаратов (П) "Dr. Nona" и изучить влияние одного из них - "Оксина" на уровень липопероксидного окисления (ПОЛ), антиоксидантную активность и содержание Fe3+-трансферрина (Fe3+-ТФ) и Си 2+-церулоплазмина в плазме крови собак.

Материалы и методы.

Были изучены препараты "Оксин", предназначенный для профилактики сердечно-сосудистых заболеваний и замедления процессов старения (I); "Полоскание рта" с противовоспалительным эффектом (II); "Бальзам вокруг глаз" (III); "Квартет солей" для ванн (IV); "Динамический увлажняющий крем" (V), нативная лечебная грязь (VI).

Определение эффективной концентрации антиоксидантных добавок (InH) в П осуществляли кинетическим методом по способности П ингибировать поглощение кислорода в модельной реакции цепного инициированного окисления лимонена и хемилюминесцентным (ХЛ) методом по способности П тормозить химически инициированное радикальное окисление кумола.

Антирадикальную активность П оценивали ХЛ-методом по величине эффективной константы Кin скорости взаимодействия молекул АО добавок с пероксирадикалами ROO в модельной системе окисления кумола. Общую антиоксидантную активность (АОА) определяли по способности П тормозить реакцию термического окисления метилового эфира олеиновой кислоты (метилолеата).

При изучении влияния "Оксина" (ПI) на метаболические показатели плазмы крови были использованы беспородные собаки после карантинного периода с оценкой биохимических исходных показателей крови. Определение АОА плазмы крови проводили ХЛ-методом по способности образца плазмы тормозить химически инициированное радикальное окисление кумола. Вторичные продукты пероксидного окисления липидов определяли по образованию окрашенных аддуктов с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК-активные продукты), суммарное оптическое поглощение которых характеризовало интенсивность пероксидного окисления. Измерение пулов важнейших плазменных белков Fe3+-трансферрина (Fe3+-ТФ) и Си 2+-церулоплазмина (Си2+ -ЦП) в плазме крови собак проводили в течение 10 суток после лечения капсулы ПI методом электронного парамагнитного резонанса (ЭПР).

Результаты. ПI, ПIII и ПV содержат сильные антиоксиданты, характеризующиеся высокими значениями константы Kin ингибирования Кш (7,6*104; 1,5*105 и 1,2*105 М-1* с-1 соответственно), близкими к значению Кin для а-токоферола (1,2*105 M-1*c-1). ПII, ПIV и ПVI содержат более слабые антиоксиданты, для которых Kin равна 2,5*104 ; 1,1*104 и 1,.3*104 V-1*c-1, что ближе к значению Kin = 1,4*104 М-1*с-1 для ионола. Зависимость АОА от концентрации ПIII и ПIV в пробах, добавляемых в модельную систему термического окисления метилолеата, имеет экстремальный характер. Максимальный АО эффект ПIII выявлен при 2,32*10-3 г/мл метилолеата, а ПV - 2,83* 10-3 г/мл метилолеата. При уменьшении или увеличении концентрации ПV его АОА падает в 5,3 раза. При уменьшении концентрации ПIII на порядок АОА снижается в 2,5 раза, а при увеличении концентрации в 2 раза ПIII оказывает слабый прооксидный эффект. Для ПIV наблюдали линейную концентрационную зависимость торможения окисления метилолеата.

Показано, что одноразовое введение собакам 2 капсул "Оксина" приводит к срочному повышению в 6 раз антирадикальной активности плазмы крови, в 2-3 раза - пула Fe3+ -трансферрина; уровень Си2+ -церулоплазмина повышается на 20-30% относительно исходного. Нормализация этих показателей наблюдается к 7 суткам. Шестиразовое ежедневное введение "Оксина" приводит к сохранению в течение продолжительного времени высоких значений этих показателей. Повышение уровня Fe3+-ТФ приводит к активации пролиферации и обновлению клеток, так как Fe3+-ТФ стимулирует синтез железосодержащих белков в органах животных, в частности рибонуклеотидредуктазы - фермента, катализирующего синтез дезоксирибонуклеотидов и контролирующего синтез ДНК. Роль системы синтеза предшественников ДНК в процессах репарации повреждений ДНК и репликативного синтеза в адаптивных реакциях клеток хорошо известна. Увеличение антирадикальной активности плазмы крови и содержания Си2+ -ЦП способствует повышению резистентности организма. Таким образом, изменения в содержании железотранспортного белка трансферрина и медьтранспортного белка церулоплазмина, а также антирадикальной активности плазмы крови являются чувствительной тест-системой на введение малых количеств биологически активных пищевых добавок, терапевтических доз препаратов различного назначения. По этим показателям можно проводить контроль метаболических сдвигов, инициированных приемом биологически активного вещества, контролировать режимы и дозы введения, прогнозировать оптимальные схемы введения препаратов.

Заключение.

Использование трех изученных модельных реакций для оценки антиоксидантных и антирадикальных свойств препаратов является достаточно информативным. "Оксин", "Динамический увлажняющий крем" и "Бальзам под глаза" содержат сильные антиоксиданты типа а-токоферола; "Полоскание для рта", "Квартет солей" и лечебная грязь содержат более слабые ингибиторы типа ионола. Первая группа препаратов содержит в меньшем количестве (InH) добавки по сравнению со второй. Для препаратов с сильными (InH) добавками характерен быстрый их расход, а для препаратов со слабыми (InH) добавками - более медленный.Одно- и многоразовое введение собакам внутрь капсулированного "Оксина" быстро приводит к повышению антирадикальной активности плазмы крови, увеличению содержания трансферрина и церулоплазмина в крови, что свидетельствует о повышении резистентности системы крови к неблагоприятным воздействиям.

Анализ плазмы крови и цельной крови методами ЭПР и ХЛ может быть успешно использован для оценки протекторного и стимулирующего эффектов биологически активных соединений, а также возможного токсического действия как самих этих соединений, так и продуктов их превращения.