- •Введение
- •История развития микробиологии.
- •Глава 1. Место микроорганизмов среди других живых существ. Классификация и систематика.
- •Глава 2. Морфология микроорганизмов.
- •Глава 3. Методы микроскопического исследования микробов.
- •Глава 4. Физиология микроорганизмов
- •Глава 5. Методы культивирования микроорганизмов. Изучение культуральных и биохимических свойств.
- •Глава 6. Общая вирусология.
- •Глава 7. Бактериофаги и бактериофагия.
- •Глава 8. Экологическая микробиология (микроэкология).
- •Глава 9. Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы.
- •Глава 10. Генетика микроорганизмов
- •Глава 11. Антибиотики.
- •Глава 12. Микрофлора организма человека
- •Глава 13. Инфекция
- •Глава 14. Иммунитет
- •Антигены
- •Иммунный ответ (иммуногенез)
- •Аллергия
- •Реакции иммунитета
- •Диагностические препараты
- •Лечебные и профилактические препараты
- •Иммунные сыворотки и иммуноглобулины
- •Часть вторая. Частная микробиология
- •Стафилококки
- •Стрептококки
- •Пиогенные (гноеродные) стрептококки
- •Скарлатинозный стрептококк
- •Пневмококки
- •Энтерококки
- •Менингококки
- •Гонококки
- •Семейство кишечных бактерий
- •Эшерихии
- •Сальмонеллы
- •Сальмонеллы - возбудители брюшного тифа и паратифов
- •Шигеллы
- •Холерный вибрион
- •Кампилобактеры
- •Хламидии
- •Возбудители вирусных заболеваний
Часть вторая. Частная микробиология
Методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний
Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний проводится по следующим направлениям: 1)обнаружение возбудителя заболевания в патологическом материале; 2)обнаружение специфических антител в сыворотке крови больного (серологическая диагностика);3)выявление у больного повышенной чувствительности к возбудителю с помощью аллергических проб.
Обнаружение и идентификацию возбудителя заболевания проводят, используя микроскопический, микробиологический и биологический методы.
Микроскопический метод используется для обнаружения возбудителя непосредственно в патологическом материале. Может применяться как самостоятельный метод в отношении некоторых микроорганизмов с характерной морфологией. С помощью микроскопического метода можно сделать заключение при обнаружении гонококков в гное, менингококков в спинномозговой жидкости, палочек туберкулеза, а также простейших: плазмодиев малярии, лейшманий, дизентерийной амебы. Микроскопия применяется как обязательный этап исследования при микробиологическом методе.
Микробиологический метод применяется для выделения чистой культуры микробов и их идентификации по ряду признаков: морфологии, способности окрашиваться красителями (тинкториальные свойства), характеру роста на питательных средах (культуральные свойства), ферментации углеводов, белков и других веществ (биохимические свойства) и по антигенной структуре. Для эпидемиологического анализа проводят внутривидовую идентификацию - определение серовара, фаговара, биовара. С целью назначения рациональной антибиотикотерапии определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам.
Для экспресс-диагностики применяют РИФ со специфическими сыворотками. Метод позволяет выявить возбудителя в исследуемом материале в течение нескольких часов.
В последнее время для идентификации микробов применяют методы, основанные на исследовании состава ДНК. Для этого существует несколько методов.
1)Определение процентного соотношения гуанин + цитозин/ аденин + тимин (Г +Ц/А + Т) (см. главу 4).
2)Определение последовательности нуклеотидов в ДНК микроба. С этой целью путем нагревания вызывают разделение ДНК на две нити, добавляют "ДНК-зонд" - участок известной ДНК, меченный радиоактивной меткой, или ферментом, или биотином. ДНК-зонд присоединяется к одной из нитей исследуемой ДНК, если он комплементарен, то есть соответствует ей. Присоединение обнаруживается по наличию метки.
3)Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет увеличить количество исследуемой ДНК с помощью фермента полимеразы и таким образом обнаружить даже небольшие количества ДНК.
Биологический метод заключается в заражении животных исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры или в обнаружении токсина и определения его вида и типа.
Серологические методы направлены на выявление специфических антител в сыворотке крови пациента. Для этого используют реакции иммунитета. С целью выявления динамики нарастания титра антител исследуют парные сыворотки, полученные от пациента в начале болезни и через 1-3 недели.
Аллергический метод применяется для выявления повышенной чувствительности к возбудителю путем постановки внутрикожных проб с аллергеном.
Взятие материала на исследование и пересылка его в лабораторию. Результат микробиологического исследования во многом зависит от правильного взятия и пересылки материала в лабораторию. Выбор материала зависит от характера заболевания и локализации патологического процесса. Исследуют мокроту, гной, испражнения, мочу, кровь и др. Материал следует брать до лечения антибиотиками, в достаточном количестве, в стерильную посуду, с соблюдением приемов, обеспечивающих стерильность. Посуда и инструменты для взятия материала не должны содержать следов дезинфицирующих веществ. Испражнения берут из прямой кишки ректальной трубкой или шпателем6 или же собирают в стерильные картонные тарелки; используют также судна, обработанные дезинфицирующим раствором и тщательно промытые горячей водой. Мочу берут стерильным катетером. Рвотные массы собирают в стерильные банки, мокроту в стерильные банки с пробкой или в чашки Петри. Гнойное отделяемое ран берут стерильным ватным тампоном или исследуют тампоны, извлеченные из ран при перевязках. Соскобы со слизистых оболочек зева и носа - стерильным ватным тампоном на проволоке.
Специальные приемы используются при коклюше (метод кашлевых пластинок), при исследовании на менингококковое носительство (носоглоточный тампон).
Материал для исследования на неспорообразующие анаэробы при взятии и пересылке тщательно оберегают от соприкосновения с воздухом.
Кровь для посева берут с соблюдением правил асептики, предварительно протерев кожу 70% спиртом, стерильным шприцем из локтевой вены в количестве 5-10 мл и сразу же засевают во флакон с жидкой питательной средой, количество которой должно быть в 10 раз больше количества взятой крови (для устранения бактерицидных свойств крови).
Исследуемый материал доставляется в лабораторию как можно скорее.
В направлении, прилагаемом к материалу, указывается: 1)фамилия, имя, отчество больного; 2)характер материала; 3)день взятия; 4)предполагаемый диагноз; 5)цель исследования; 6)подпись врача.
Патогенные кокки
Среди кокков встречаются как сапрофиты, обитающие во внешней среде и в организме человека, так и условно-патогенные и патогенные виды, вызывающие различные заболевания. Патогенные свойства были приобретены кокками в процессе эволюции, в ходе которой они приспособились к паразитическому существованию в организме человека и животных, причем паразитизм у кокков выражен в различной степени.
К патогенным коккам относятся стафилококки, стрептококки, пневмококки, менингококки, гонококки. Все они могут вызвать гнойно-воспалительные процессы, поэтому их называют гноеродными кокками.
Строго шаровидную форму имеют стафилококки; стрептококки овально вытянуты; пневмококки сходны с ланцетом; менингококки и гонококки имеют вид кофейного зерна или бобовидную форму. Размеры клеток 0,5-1,5 мкм.Стафилококки располагаются гроздьями, стрептококки - цепочками, пневмококки, менингококки и гонококки - попарно (диплококки). Все патогенные кокки не имеют жгутиков и не образуют спор.
Стафилококки, стрептококки и пневмококки грамположительны, менингококки и гонококки грамотрицательны.
Менее всех требовательны к питательным средам стафилококки, которые растут на простых питательных средах; стрептококки и пневмококки культивируются на кровяных и сахарных средах, менингококки - на средах с добавлением сыворотки крови, для гонококков питательная среда должна содержать нативный человеческий белок. С увеличением паразитических свойств кокков снижается их устойчивость во внешней среде. Различаются они и по степени органотропности. Менее всего выражена органотропность у стафилококков, она возрастает у стрептококков и пневмококков и более всего выражена у менингококков и гонококков.