Контрольные вопросы

1. Какие таутомерные формы возможны для урацила и какая из форм участвует в образовании нуклеозида уридина? Какая форма урацила является преобладающей? Сохраняется ли ароматичность нуклеинового основания в лактамной форме?

2. Приведите структурную формулу молекулы АТФ. Укажите сложноэфирную и N-гликозидную связи в молекуле.

3. Напишите структурную формулу уридина. Укажите N-гликозидную связь. В какой форме моносахарид входит в состав нуклеозида?

4. Напишите структурную формулу тимидина. Укажите N-гликозидную связь. В какой форме моносахарид входит в состав нук­леозида.

5. Напишите уравнение реакции цитозина с азотистой кисло­той. Объясните мутагенность азотистой кислоты. Покажите комп­лементарное взаимодействие цитозина и продукта его взаимодействия с азотистой кислотой с соответствующими нуклеиновыми основаниями.

6. Напишите уравнение реакции глицина с АТФ. Назовите продукты реакции и образовавшуюся функциональную связь.

7. Напишите структурные формулы нуклеотидов: 5-дезоксиадениловой кислоты, гуанозин-5-монофосфата. Укажите сложноэфирную и N-гликозидную связи в молекулах. Напишите уравнения кислотного и щелочного гидролиза данных нуклеотидов.

8. Какие связи обусловливают первичную и вторичную структуру нуклеиновых кислот?

Лабораторная работа.

Гидролиз нуклеиновых кислот.

Цель работы. Научиться осуществлять гидролиз биоорганиче­ских фракций, содержащих нуклеопротеины, а также идентифи­цировать компоненты нуклеопротеинов в гидролизате фракций.

Приборы и оборудование. Пробирка для гидролиза; обратный холодильник; пробирки лабораторные; штатив.

Реактивы. Раствор аммиака концентрированный; раствор NaOH (1 моль/л); раствор CuSO₄ (10%); раствор AgNO₃ (10%); раствор молибдата аммония; растворы серной и азотной кислот (1 моль/л).

Сущность работы. Изучение химического состава нуклеопроте­инов удобно проводить на дрожжевых клетках. При непродолжи­тельном гидролизе дрожжевой массы или выделенных из нее нук­леопротеинов последние (нуклеопротеины) распадаются на поли­пептиды, пуриновые и пиримидиновые основания, рибозу и дезоксирибозу, фосфорную кислоту. Продукты гидролиза могут быть обнаружены специфическими для каждого вещества реакциями.

Ход работы. Опыт 1. Гидролиз фракции, содержащей нуклеопротеины. В пробирку для гидролиза (широкую длинную, снабжен­ную пробкой с обратным холодильником) помещают 0,5 г пекар­ских дрожжей, добавляют 10 мл 1 М раствора серной кислоты. Пробирку закрывают пробкой с обратным холодильником. Со­держимое пробирки кипятят над асбестовой сеткой в течение 60 мин. Затем содержимое пробирки охлаждают до комнатной тем­пературы и фильтруют через бумажный фильтр.

Опыт № 2. Качественные реакции на компоненты нуклеопротеинов в гидролизате фракции.

1. В пробирку помещают 0,5 мл фильтрата гидролизата и проводят биуретовую реакцию. О результатах на­блюдений делают отметку в табл.

Качественные реакции на компоненты нуклеопротеинов

№ опыта	Реактив	Уравнение реакции	Результаты наблюдений
1
2
3
4

2. В пробирку помещают 0,5 мл фильтрата гидролизата, добавляют 2 капли концентрированного раствора аммиака, 0,5 мл 10 % раствора нитрата серебра. Через 5 мин наблюдают образование рыхлого бурого осадка. Эта реакция доказывает наличие в растворе пуриновых оснований.

3. В пробирку помещают 0,5 мл фильтрата гидролизата, добав­ляют 10 капель 1 М раствора гидроксида натрия и 6 капель 10 %раствора сульфата меди (П). Наблюдают появление мути. Содержи­мое пробирки нагревают до кипения. В табл. __ делают отметку о результатах наблюдений.

4. В пробирку помещают 0,5 мл фильтрата гидролизата, добавляют 2 мл насыщенного раствора молибдата аммония и 1 мл концентрированного раствора азотной кислоты. Содержимое пробирки перемешивают и кипятят 3 — 5 мин. Наблюдают появление лимонно-желтой окраски. Эта реакция доказывает наличие в раство­ре фосфорной кислоты.

Оформление протокола. В лабораторном журнале должны быть приведены:

1. название работы;

1. цель работы;

2. приборы и оборудование;

3. реактивы;

4. сущность работы;

5. экспериментальные данные (табл. 5.8);

6. выводы.