Проведение исследования
Микроскопическое исследование.
Для микроскопии готовят мазки, равномерно распределяя материал на стекле мягкими движениями, избегая грубого втирания. Это позволяет клеткам располагаться слоями, не повреждает их и сохраняет истинное распределение и количественное соотношение компонентов исследуемого материала, позволяет наблюдать внутриклеточное расположение бактерий (например, гонококка). После высушивания при комнатной температуре мазки покрывают предметным стеклом или помещают в чашку Петри и отправляют в лабораторию. В лаборатории производят окраску мазка по методу Грама, метиленовым синим или по Романовскому.
Микроскопия вагинального мазка, окрашенного по Граму, позволяет оценить состояние вагинального микроценоза по совокупности следующих признаков:
Состояние вагинального эпителия: принадлежность клеток эпителия к поверхностному, промежуточному, парабазальным слоям, наличие "ключевых" клеток (эпителиальные клетки с адсорбированными на них бактериями).
Наличие лейкоцитарной реакции.
Состав вагинальной микрофлоры (количественная и качественная характеристика морфотипов бактерий).
Количественная характеристика микрофлоры проводится по четырёхбальной системе, исходя из числа микробных клеток в поле зрения препарата при увеличении с иммерсией.
(+) до 10 микробных клеток в поле зрения - незначительное количество.
(+ +) от 11 до 10х2 микробных клеток в поле зрения - умеренное количество.
(+ + +) от 10х2 до 10х3 микробных клеток в поле зрения - большое количество.
(++++) >10х3 микробных клеток в поле зрения - массивное количество.
На основании этих параметров можно поставить диагноз такого распространённого заболевания, как бактериальный вагиноз, возбудителями которого являются неспорообразующие бактерии и Gardnerella vaginalis. Присутствие в мазке из отделяемого влагалища "ключевых" клеток создаёт характерную и специфическую картину этого заболевания.В лаборатории доставленные мазки исследуемого материала окрашивают по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом. Отмечают проявления воспалительной реакции: наличие лейкоцитов, слизи, фибрина, при обнаружении микроорганизмов отмечают степень обсеменённости, отношение к окраске по Граму и морфологические особенности. В частности, при обнаружении грамотрицательных диплококков, особенно при внутриклеточном их расположении, следует обратить внимание лечащего врача на необходимость дополнительного исследования больной на гонорею. Выявление в мазках простейших (трихомонады), мицелия или бластоспор гриба может служить основанием для выдачи ответа лечащему врачу об обнаружении этих микроорганизмов в исследуемом материале.
Культуральное исследование.
Посев материала проводится на набор стандартных питательных сред, позволяющих выявить максимально возможный спектр микроорганизмов (5% кровяной агар, сахарный бульон, среда Эндо). Для выделения факультативно-анаэробных бактерий используют сахарный агар с добавлением 5% крови, для выделения лактобактерий используют агаризованный вариант среды MRS фирмы Дифко и РС-4. Выделение гарднерелл производят на селективной среде Columbia-CNA агаре с 5% кровью. Микроаэрофилы выращивают в условиях пониженного содержания кислорода, в атмосфере СО2 в эксикаторе, дрожжеподобные грибы на среде Сабуро. Для выделения гонококка производят посев на специальные питательные среды для гонококка, среды инкубируют во влажной атмосфере, богатой СО2.
Доставленные в лабораторию жидкие пробы (гной, эксудат, содержимое тубоовариальных образований, околоплодные воды) засевают по 0,1 мл на плотные питательные среды, растирая материал по поверхности среды шпателем. Используют кровяной агар, среду Эндо. Кроме того, посев производят в сахарный бульон.
Кусочки тканей измельчают в микроизмельчителе тканей или растирают в ступке с песком, соблюдая стерильность, добавляя питательный бульон или физиологический раствор. Полученную взвесь засевают на несколько чашек с плотными питательными средами, а также в сахарный бульон.
При помутнении бульона делают мазки на стекле (окраска по Граму) и в соответствии с результатами микроскопии производят высевы на плотные питательные среды (кровяной агар, желточно-солевой агар, среду Эндо). Затем проводят видовую идентификацию микроорганизмов, определение их чувствительности к антибактериальным препаратам.
Все выделенные культуры идентифицируют, определяют чувствительность к антибактериальным препаратам.