Техника микрохимического исследования лекарственного растительного сырья.

Микрохимические и гистохимические реакции проводят одновременно с микроскопическим анализом лекарственного растительного сырья, наблюдая их результаты под микроскопом. При выполнении микрохимических реакций повышается чувствительность реакции. При помощи гистохимических реакций можна определить природные соединения непосредственно в клетках и структурах, где они локализуются.

Гистохимические реакции проводят на срезах свежего или фиксированного материала, в некоторых случаях можно использовать сухой растительный материал. Наиболее чёткие результаты можно получить, когда во время реакции образуются нерастворимые соединения. Если при взаимодействии реактива с исследуемым действующим веществом образуются растворимые соединения, то реакцию необходимо проводить очень быстро и наблюдать её результаты в момент проведения или сразу же после нанесения реактива, пока не началась диффузия. Результаты реакции наблюдают при малом увеличении, а потом - при большом.

Плоды, семена.

Порошок.

Крахмал. Готовят два препарата – в растворе йода (раствор Люголя) и в воде; от йода крахмальные зёрна окрашиваются в синий цвет. В воде определяют их форму, строение, размеры крахмальных зёрен измеряют окулярным микрометром.

Жирные и эфирные масла. Для определения жирного и эфирного масел готовят препарат в растворе Судана-3 и подогревают; капли жирного и эфирного масел окрашиваются в оранжево-красный цвет.

Слизь. Для определения слизи готовят препарат порошка в растворе чёрной туши и одновременно рассматривают по микроскопом (малое увеличение); слизь видно в виде бесцветной массы на чёрном фоне.

Кора.

Цельное сырьё.

Одревесневшие (лигнифицированные) элементы. К срезу на предметном стекле добавляют несколько капель раствора флороглюцина и 1 каплю 25% раствора сульфатной кислоты. Через минуту жидкость отсасывают полоской фильтровальной бумаги, срез погружают в раствор хлоралгидрата или глицерина и накрывают покровным стеклом (рассматривают без подогревания); одревесневшие механические элементы окрашиваются в малиново-красный цвет.

Для обесцвечивания одревесневших элементов можно использовать также раствор сафранина. Срезы помещают в 1% раствор сафранина в 50% спирте на 30 минут (в закрытом бюксе или часовом стекле), промывают сначала 50% спиртом, потом подкисленным спиртом (на 100 мл спирта добавляют 2 капли концентрированной хлоридной кислоты ) и фиксируют на предметном стекле в глицерине. Одревесневшие оболочки окрашиваются в красный цвет.

Крахмал. Для определения крахмала делают соскоб сухой коры и рассматривают его в растворе Люголя. Крахмальные зёрна окрашиваются в синий цвет.

Дубильные вещества. Наличие дубильных веществ устанавливают путём нанесения 1 капли раствора железоаммонийных квасцов или хлорида железа (III) на внутреннюю поверхность сухой коры. Появляется чёрно-зелёное окрашивание.

Производные антрацена. Присутствие производных антрацена определяют путём нанесения 1-2 капель гидроксида натрия на внутреннюю поверхность коры (кроваво-красное окрашивание) или проводят микросублимацию описанным ниже способом.

Резаное сырьё.

Одревесневшие элементы определяют по реакции, которая описана для цельного сырья.

Наличие крахмала, дубильных веществ, производных антрацена определяют в соскобе сухой коры.

Порошок.

Одревесневшие (лигнифицированные) элементы. На предметное стекло помещают около 0,1 г порошка, добавляют 1-2 капли раствора флороглюцина, 1 каплю 25% рствора сульфатной кислоты и накрывают покровным стеклом. Потом с одной стороны наносят раствор хлоралгидрата, а с противоположной - отсасывают раствор фильтровальной бумагой. Одревесневшие механические элементы окрашиваются в малиново-красный цвет.

Производные антрацена (реакция микросублимации). На предметное стекло ставят трубку диаметром 1,5 и высотой 2 см. В середину стеклянной трубки помещают небольшое количество исследуемого порошка (или соскоба), сверху накрывают другим предметным стеклом, ставят на азбестову сетку, которую закрепляют в штативе, и нагревают. Пламя горелки необходимо держать от предметного стекла на расстоянии 5-7 см.

На поверхности стекла, которое служит для собирания сублимата, помещают кусочки фильтровальной бумаги, которые смачивают время от времени холодной водой. Через некоторое время на нижней стороне стекла появляется налёт. Под микроскопом в сублимате видно тонкие жёлтые иголочки, которые в ультрафиолетовом свете (люминесцентный микроскоп) имеют ярко - жёлтое или оранжево-красное свечение. В 5% спиртовом растворе гидроксида калия сублимат растворяется с красным окрашиванием.