Идентификация флавоноидов методом бумажной хроматографии

На линию старта бумажной хроматограммы размером 11x21 см, с помощью капилляра в виде точки (5 мкг) наносили спиртовое извлечение 70 %. Рядом наносили 4 спир­товых раствора свидетелей: кверцетин, рутин, лютеолин, гиперозид. Бума­гу высушивали на воздухе до полного удаления растворителей, затем по­мещали в камеру со смесью растворителей: бутанол-1 - ледяная уксусная кислота - вода (4:1:2), предварительно насыщенную данной смесью не ме­нее 40 минут и хроматографировали восходящим способом. Когда фронт растворителя проходил до линии финиша, хроматограмму вынимали из камеры, сушили на воздухе до удаления растворителей. Затем обрабатыва­ли парами аммиака, высушивали на воздухе и рассматривали в УФ свете. На хроматограмме извлечения наблюдали 3 пятна: желтого, светло-коричневого, бурого цвета. Первое пятно соответствовало по положению и окраске пятну кверцетина (Rf 0.71), второе - рутину второе - (Rf 0,31), третье - лютеолину (Rf 0,77). Гиперозид проявился только в виде пятна стандартного образца желто-оранжевого цвета (рис.19)

На хроматографию нанесены:

1. Кверцетин

2. Рутин

3. Лютеолин

4. Гиперозид

5. 70% спиртовое извлечение

1 2 3 4 5

Система: бутанол-1 - кислота уксусная ледяная - вода (4:1:2)

Рисунок 19 - Бумажная хроматограмма спиртовых извлечений 70% из сбора «Некашлин»

Для пятен, соответствующих кверцетину, рутину, лютеолину и гиперозиду рассчитали значения Rf (среднее из трех определений): 0,71 (кверцетин); 0,31 (рутин); 0,77(лютеолин).

Таким образом, в спиртовых извлечениях установлено наличие кверцетина, рутина и лютеолина.

2.3.1.2 Дубильные вещества

Как известно к растительным полифенольным соединениям относят также дубильные вещества. По данным литературы известно, что для проведения качественных реакций на дубильные вещества необходимо получение водного извлечения из сырья.

Для идентификации дубильных веществ из растительного сырья готовили водные извлечения. Для этого 1,0 г измельченного растительного сырья заливали 100 мл воды, нагревали на водяной бане 20-30 минут, полученное извлечение фильтровали и использовали для проведения качественных реакций:

- к 2-3 мл извлечения добавляли по каплям раствор желатина 10%. Наблюдали появление мути, исчезающей при добавлении избытка желатина;

- к 2-3 мл извлечения прибавляли несколько капель раствора хинина дихлорида 1%. Появлялся аморфный осадок;

- при добавлении к 2-3 мл извлечения 4-5 капель раствора железоаммониевых квасцов появлялось черно-синее окрашивание, что свидетельствовало о наличии гидролизованных дубильных веществ;

- к 10 мл извлечения прибавляли 5 мл смеси, состоящей из 2 мл кислоты хлористоводородной, разведенной в соотношении 1:1, и 3 мл раствора формальдегида 40%. Полученную смесь кипятили 30 минут в колбе с обратным холодильником. При этом выпадал осадок конденсированных дубильных веществ. Осадок отфильтровывали. К 2 мл фильтрата добавляли 10 капель раствора железоаммониевых квасцов 1 % и около 0,2 г кристаллического свинца ацетата. Наличие в нейтральной среде сине-фиолетового окрашивания свидетельствовало о наличии гидролизуемых дубильных веществ;

- к 2-3 мл извлечения прибавляли по каплям бромную воду (5 г брома в 1 л воды) до тех пор, пока от одной капли бромной воды раствор не приобретет желтую окраску. Отсутствие осадка свидетельствовало о наличии гидролизуемых дубильных веществ;

- к 1 мл извлечения добавляли 2 мл кислоты уксусной 10% и 1 мл раствора свинца ацетата 10%. При добавлении 5 капель раствора железоаммониевых квасцов 1% и 0,1 г свинца ацетата фильтрат не изменял окрашивание, что свидетельствовало об отсутствии конденсированных дубильных веществ.

Таким образом, в сборе «Некашлин» были идентифицированы дубильные вещества гидролизуемой группы.