2.3 Фитохимический анализ сбора «Некашлин»

2.3.1 Анализ качественного состава фенольных соединений 2.3.1.1 Флавоноиды

Качественный состав флавоноидов в сборе «Некашлин» мы исследовали, используя спиртовое извлечение (спирт этиловый 70%). Присутствие флавоноидов определяли по качественным реакциям:

- цианидиновая проба (по Chinodi) - при прибавлении к извлечению кислоты хлористоводородной в присутствии металлического магния наблюдали розовое окрашивание;

- реакция с раствором свинца ацетата: при прибавлении к извлечению раствора свинца ацетата 2% выпадает желтый осадок;

- реакция с раствором аммония гидроксида: при прибавлении к извлечению раствора аммония гидроксида наблюдали желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое.

В результате анализа нами подтверждено наличие в извлечении флавоноидов.

Идентификация флавоноидов с помощью тонкослойной хроматографии

На линию старта пластинок «Сорбфил» размером 7x15 см и «Си-луфол» размером 8x10 см, с помощью капилляра в виде точки (5 мкг) на­носили спиртовое извлечение 70%, из сбора «Некашлин». Рядом наносили 4 спиртовых раствора свидетелей: кверцетин, ру­тин, лютеолин, гиперозид. Пластинки с нанесенными пробами высушива­ли на воздухе в течение 10 минут, помещали в камеры со смесью раство­рителей: бутанол-1 - кислота уксусная ледяная - вода (4:1:2), предвари­тельно насыщенные в течение 40 минут, и хроматографировали восходя­щим способом. Когда фронт растворителей прошел 12 см, пластинки вы­нимали, сушили в сушильном шкафу в течение 20 минут и просматривали в УФ-свете (360 нм). На пластинках «Силуфол» наблюдали пятна корич­невого, бурого, розового и желтого цветов (рис ?), а на пластинках «Сорбфил» - пятна буро-красного, темно-коричневого и малинового и желто-оранжевого цветов (рис. ?). Затем пластинки обрабатывали парами аммиака, высушивали сначала на воздухе, затем в сушильном шкафу. По­являлись пятна темно-фиолетового цвета. Окраска пятен и значение Rf представлены в таблице? .

А. Пластинка «Силуфол»

На пластинку нанесены:

1. Кверцетин

2. Рутин

3. Лютеолин

4. 70% спиртовое извлечение

Система: бутанол-1 – кислота уксусная ледяная – вода (4:1:2)

1 2 3 4 5

Рисунок 167 – Хроматограмма спиртовых извлечений из сбора «Некашлин» на пластинке «Силуфол»

Б) Пластинка «Сорбфил»

1 2 3 4 5

Рисунок 18 – Хроматограмма спиртовых извлечений из сбора «Некашлин» на пластинке «Сорбфил»

На пластинку нанесены:

1. Кверцетин

2. Рутин

3. Лютеолин

4. Гиперозид

5. 70 % спиртовое извлечение

Таблица б. Значения Rf и окраска пятен на хроматограммах спиртовых извлечений сбора «Некашлин»

№ пятна	Значение Rf		Окраска
	На пластинке «Силуфол»	На пластинке «Сорбфил»	«Силуфол»	«Сорбфил»
I	0,75	0,88	т.кор / мал.	кор./ роз.
II	0,38	0,50	бур. /т.фиол.	бур. /т.фиол.
III	0,63	0,77	желт. /б.-к.	желт./б.-к.
IV	-	-	желт.	желт./оранж.

Примечание: окраска пятен: т.кор - темно- коричневая; кор.- корич­невая; желт.- желтая; роз.- розовая; бур.- бурая; мал.- малиновая; б.-к. - бу­ро-красная; т.фиол.- темно-фиолетовая; желт./оранж.-желто-оранжевая.

По окраске пятен на хроматограммах, а также по значению Rf веще­ства 1, 2, 3,4 могут быть идентифицированы с кверцетином (Rf =0,82), рутином (Rf=0,44) и лютеолином (Rf=0,7). Гиперозид на хроматограмме про­явился только в качестве стандартного образца.