Работа 8. Реакция Фоля.

Принцип метода. Реакция основана на способности белка, имеющего в своем составе серусодержащие аминокислоты (цистеин, цистин), под влиянием щелочи при нагревании образовывать сернистый натрий, который с плюмбитом натрия дает черный осадок сернистого свинца. Метионин, реакции не дает, т.к. сера в нем прочно связана с метильной группой.

Возьмите две пробирки. В одну поместите 10 капель яичного белка, в другую – 10 капель 1% раствора цистеина, и добавьте в обе пробирки вдвое больший объем 10% раствора гидроксида натрия. Содержимое пробирок перемешайте, нагрейте до кипения (1-2 минуты). К полученным щелочным растворам добавьте по 5 капель 10% ацетата свинца (II) и вновь прокипятите. Отметьте появление серо-черного осадка.

Эталоны ответов к тестовым заданиям

1.1. – А

1.2. – В

2.1. – 1-Г, 2-Д

2.2. – 1-Д, 2-Б, 3-А

3.1. – все

3.2. – 1,2,3

4.1. – А (+ + +)

4.2. – А (+ + +)

Эталоны ответов на контрольные упражнения

Занятие 2. Организация белковой молекулы.

Биологические функции белков.

Цель занятия. Овладеть некоторыми методами качественного и количественного анализа белков, освоить правила работы с биологическим материалом, научиться производить измерения оптической плотности на фотоэлектроколориметре.

Содержание занятия.

– контроль выполнения заданий по самоподготовке;

– выполнение заданий тестового контроля;

– освоение метода сравнения свойств ферментов и минеральных катализаторов;

– выполнение работы по количественному определению содержания белка в сыворотке крови биуретовым методом;

– заслушивание и обсуждение реферативных сообщений;

– контроль усвоения темы путем устного собеседования с преподавателем.

Примерные темы реферативных сообщений по УИРС:

1. Основные методы исследования первичной структуры белков.

2.Шапероны и их роль в пространственной укладке синтезированной полипептидной цепи, характеристика химических связей, стабилизирующих третичную и четвертичную структуры белка.

Методические указания к самоподготовке

Используя лекции и учебник по биохимии, изучите химический состав, строение, уровни организации белковой молекулы, свойства и функции белков.

Вопросы и упражнения для аудиторной и внеаудиторной работы:

1. Вспомните элементный состав белков живых объектов.

2. Опишите функциональное многообразие белков: белки -ферменты, белки-рецепторы, транспортные белки, антитела. Приведите примеры белковых гормонов, важнейших сократительных и структурных белков.

3. Что такое первичная структура белка? (Дайте определение).

4. Напишите структурную формулу трипептида мет-про-илей.

5. Что такое вторичная структура белка, какие ее разновидности вы знаете? Дайте характеристику связи, стабилизирующей вторичную структуру.

6. Нарисуйте схему α-спирали и β-складчатого листа.

7. Что такое третичная структура белка? Выпишите связи, стабилизирующие третичную структуру.

8. Что такое четвертичная структура? Приведите примеры белков, имеющих четвертичную структуру.

9. Какие методы гидролиза белка Вы знаете?

10. Приведите примерную последовательность операций при установлении первичной структуры белка.

11. Продумайте, какое практическое значение для медицины имеют методы качественного и количественного анализа белков и отдельных аминокислот, исследование аминокислотного состава и первичной структуры белков.

12. Опишите принцип количественного определения белка по белковому азоту.

13. Сформулируйте принцип количественного определения белка биуретовым методом.

14. В чем суть метода формольного титрования?

15. Выпишите границы нормального содержания белка в сыворотке крови у взрослых здоровых людей и детей. Приведите примеры заболеваний, сопровождающихся гипо- и гиперпротеинемией.

16. Нарисуйте график зависимости степени поглощения от интенсивности окраски раствора.

17. Занесите в тетрадь схему фотоэлектроколориметра, кратко выпишите принцип действия и последовательность операций при работе на этом приборе.