Лабораторная работа.
Качественная реакция на пептидную связь. Количественное определение белка.
Цель работы: изучить свойства белков, обусловленные их строением. Сущность работы: провести опыты, подтверждающие наличие пептидной связи, определить содержание белка в исследуемом растворе.
Реактивы: растворов яичного белка, 1%-ный раствор сульфата меди(II),
10%-ный раствор щелочи.
1. Биуретовая реакция на пептидную связь:
В
?
Уравнение реакции: |
|
Вывод: |
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________ |
2. Количественное определение белка в растворе:
В основе метода лежит биуретовая реакция ! Для построения калибровочного графика из раствора белка с точно известной массовой долей (ω = 1,00%) готовят четыре раствора методом последовательного разведения. В пять пробирок помещают по 1,00 мл растворов белка: в четыре пробирки – растворы для построения калибровочного графика, в пятую пробирку – исследуемый раствор. Содержимое пробирок перемешивают стеклянными палочками и оставляют на 20 минут при комнатной температуре. Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре ПЭ – 5300 В. Стандартный раствор готовят смешиванием 1,00 мл дистиллированной воды, 1,00 мл раствора гидроксида натрия и 0,10 мл раствора сульфата меди(II). Длина волны светофильтра – 540 нм. Записывают результаты измерений.
!!! ( эту часть работы делать не надо, в таблице представлены данные для построения калибровочного графика). В чистую пробирку помещают 2мл исследуемого раствора , добавляют по 2,00 мл раствора гидроксида натрия и 0,20 мл раствора сульфата меди(II). Содержимое пробирок перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 15 минут при комнатной температуре. Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре ПЭ – 5300 В. Длина волны светофильтра –
540 нм. Строят калибровочный график D = f (ω, %) (на миллиметровой бумаге) по готовым данным из таблицы и определяют массовую долю белка в исследуемом растворе. Делают вывод о содержание белка в исследуемом растворе.
Массовая доля белка ω, % |
1,000 |
0,75 |
0,5 |
0,25 |
Испытуемый раствор |
Оптическая плотность, D |
1.1
|
0,8
|
0.5 |
0,2 |
|
Калибровочный график D = f ( ω, %) :
В
?
23
Домашнее задание.
Приведите фрагменты простых и сложных белков:
__________________________ ____________________________
простой сложный
Приведите примеры глобулярных и фибриллярных белков:
_________________________________________________________________________
глобулярные
_______________________________________________________
фибриллярные
Какие факторы влияют на денатурацию белка? Какие явления называют необратимой денатурацией?
______________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
24
Приведите две резонансные формы пептидной связи в белках:
____________________ _______________________
Кето-форма енольная форма
За счет чего стабилизируются вторичная и третичная структуры белка?
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
Напишите цепь гептапептида, состоящего из последовательности аминокислот: серин, валин, тирозин, глутаминовая кислота, валин, аланин, гистидин. Укажите N- и С- концевые остатки. Назовите данный гептапептид.
_______________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________
25