1.1 Определение активности редуктазы с резазурином Ход определения

В пробирки вместимостью 15 см³ пипеткой вносят по 1 см³ рабочего раствора резазурина и 10 см³ исследуемого сырого молока. Пробирки закрывают резиновыми пробками и перемешивают содержимое путем трехкратного переворачивания пробирок.

Затем пробирки помещают в редуктазник (как указано выше). Наблюдение за изменением окраски ведут через 20 мин и 1 ч.

. Появление окрашивания молока в пробирке при встряхивании не учитывают.

Через 1 ч пробирки вынимают из редуктазника и анализируют. Пробирки с молоком, имеющие окрашивание от сине-сиреневого до сиреневого со слабым серым оттенком оставляют в редуктазнике еще на 30 мин.

В зависимости от продолжительности обесцвечивания или изменения цвета молоко относя к одному из четырех классов, указанных в таблице:

Таблица – Оценка качества молока по обесцвечиванию или изменению цвета резазурина

Класс молока	Продолжительность обесцвечивания или изменения окраски, ч	Окраска молока	Ориентировочное Количество бактерий в молоке, КОЕ/ см3
Высший	1,5	Сине-сиреневая до сиреневой со слабым серым оттенком	до 300 тыс.
I	1,0	То же	от 300 тыс. до 500 тыс.
II	1,0	Сиреневая с розовым отливом или ярко-розовая	от 500 тыс. до 4 млн
III	1,0	Бледно-розовая или белая	от 4 млн до 20 млн

Молоко, отнесенное к III классу по бактериальной обсемененности, считается несортовым.

Оформление результатов

Полученный результат оформляют в таблицу:

Наименование	Ед. измерения	Результат
Продолжительность обесцвечивания или изменения цвета	ч
Ориентировочное количество бактерий в молоке	КОЕ/ см3
Заключение

2 Определение активности каталазы

Сущность метода заключается в определении количества разложенного ферментом пероксида водорода.

Ход определения

Перед началом определения часть исследуемого молока кипятят для разрушения каталазы.

В две конические колбы вместимостью 200 см³ пипетками вносят в первую - 2 см³ сырого молока (опытная проба), во вторую - 2 см³ кипяченого молока (контрольная проба). Температура молока (20±1) ⁰С.

В обе колбы цилиндром добавляют 98 см³ дистиллированной воды с температурой (20±1)⁰С, содержимое колб перемешивают, колбы нагревают на водяной бане до температуры (25±1) ⁰С.

Затем в обе колбы пипеткой добавляют по 25 см³ 0,3%-ного раствора пероксида водорода, колбы закрывают пробками, их содержимое тщательно перемешивают; колбы помещают в термостат при температуре (25±1) ⁰С. Записывают время начала опыта.

Через 30 мин в обе колбы из бюретки вносят по 5 см³ 10%-ного раствора серной кислоты и титруют из бюретки 0,1 н. раствором перманганата калия до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин. Исчезновение окрашивания в более поздний срок связано с окислением органических составных частей молока.

Активность каталазы выражают в стандартных единицах (Е), а также через объем кислорода, выделившегося из определенного объема молока при определенных условиях. Зависимость между этими единицами следующая: 1Е = 6, 25 см³ кислорода..

Активность каталазы рассчитывается по формуле:

А = (V_к– V_о ) · 1,7/( m · t · 0,034 ) ,

где А - активность каталазы, Е;

V_к – объем раствора KMnO₄, израсходованного на титрование контрольной пробы, см³ ;

V_о – объем раствора KMnO₄, израсходованного на титрование опытной пробы, см³ ;

1, 7 – масса пероксида водорода, соответствующего 1см³ 0,1 н. раствора KMnO₄, мг;

m - объем молока, см³ ( m = 2 см³ );

t - продолжительность выдержки молока с раствором пероксида водорода, мин (t = 30 мин;

0,034 - масса 1 мкМ пероксида водорода, мг.

После подстановки известных значений формула принимает вид:

А = (V_к– V_о ) · 0,083 .