15. Методы генной инженерии

это инструмент биотехнологии, а не наука в целом.

применяют при исследовании с изменением генотипа; по большому счету занимается манипуляциями с генами, их частями.

конкретно, для получения рекомбинантных РНК и ДНК, выделения генов из клеток и введения генов в другие клетки.

служит для получения желаемых качеств изменяемого или генетически модифицированного организма. В отличие от традиционной селекции, в ходе которой генотип подвергается изменениям лишь косвенно, генная инженерия позволяет непосредственно вмешиваться в генетический аппарат, применяя технику молекулярного клонирования. Примерами применения генной инженерии являются получение новых генетически модифицированных сортов зерновых культур, производство человеческого инсулина путём использования генномодифицированных бактерий, производство эритропоэтина в культуре клеток или новых пород экспериментальных мышей для научных исследований.

Основные этапы решения генноинженерной задачи следующие:

1. Получение изолированного гена.

2. Введение гена в вектор для переноса в организм.

3. Перенос вектора с геном в модифицируемый организм.

4. Преобразование клеток организма.

5. Отбор генетически модифицированных организмов (ГМО) и устранение тех, которые не были успешно модифицированы.

Чтобы встроить ген в вектор, используют ферменты — рестриктазы и лигазы

С помощью рестриктаз ген и вектор можно разрезать на кусочки. С помощью лигаз такие кусочки можно «склеивать», соединять в иной комбинации, конструируя новый ген или заключая его в вектор. За открытие рестриктаз Вернер Арбер, Даниел Натанс и Хамилтон Смит также были удостоеныНобелевской премии (1978 г.).

Техника введения генов в бактерии была разработана после того, как Фредерик Гриффит открыл явление бактериальной трансформации. В основе этого явления лежит примитивный половой процесс, который у бактерий сопровождается обменом небольшими фрагментами нехромосомной ДНК, плазмидами. Плазмидные технологии легли в основу введения искусственных генов в бактериальные клетки.

***

Наиболее распространенным методом генной инженерии является метод

получения рекомбинантных, т.е. содержащих чужеродный ген, плазмид. Плазмиды

представляют собой кольцевые двухцепочные молекулы ДНК, состоящие из

нескольких тысяч пар нуклеотидов. Этот процесс состоит из нескольких

этапов.

1. Рестрикция — разрезание ДНК, например, человека на фрагменты.

2. Лигирование — фрагмент с нужным геном включают в плазмиды и сшивают их.

3. Трансформация —введение рекомбинантных плазмид в бактериальные клетки.

Трансформированные бактерии при этом приобретают определенные свойства.

Каждая из трансформированных бактерий размножается и образует колонию из

многих тысяч потомков — клон.

4. Скрининг — отбор среди клонов трансформированных бактерий тех, которые

плазмиды, несущие нужный ген человека.

Весь этот процесс называется клонированием. С помощью клонирования

можно получить более миллиона копий любого фрагмента ДНК человека или

другого организма. Если клонированный фрагмент кодирует белок, то

экспериментально можно изучить механизм, регулирующий транскрипцию этого

гена, а также наработать этот белок в нужном количестве. Кроме того,

клонированный фрагмент ДНК одного организма можно ввести в клетки другого

организма. Этим можно добиться, например, высокие и устойчивые урожаи

благодаря введенному гену, обеспечивающему устойчивость к ряду болезней.

Если ввести в генотип почвенных бактерий гены других бактерий, обладающих

способностью связывать атмосферный азот, то почвенные бактерии смогут

переводить этот азот в связанный азот почвы. Введя в генотип бактерии

кишечной палочки ген из генотипа человека, контролирующий синтез инсулина,

ученые добились получения инсулина при посредстве такой кишечной палочки.

При дальнейшем развитии науки станет возможным введение в зародыш человека

недостающих генов, и тем самым позволит избежать генетических болезней

16. метод дезинфекции

17. приготовление толстого мазка

Толстый мазок – это микропрепарат, изготовляемый из крови и предназначенный для микроскоп. выявления в крови возбудителей малярии, возвратного тифа и некоторых др. микробов, напр., менингококков.

Приготовление заключается в следующем: на границе средней и крайней трети предметного стекла наносят 2 большие капли свежей крови (в 5 - 10 раз большие, чем для тонкого мазка), углом второго стекла капли равномерно распределяют на площади в 1,5 см, капли соединяют тонкой полоской крови, на к-рой после высыхания простым карандашом проставляют номер анализа, капли высушивают на воздухе, оберегая их от насекомых, пыли, прямого солнечного света, окрашивают р-ром метиленового синего или по Романовскому -Гимзе, разведенными на дистил. воде.

При изготовлении толстых капель палец поворачивают проколом вниз. К выступающим каплям крови прикасаются предметным стеклом, на которое берут 2- 3 капли крови и затем иглой или углом другого предметного стекла кровь размазывают, чтобы получить на стекле овал диаметром около 1 см или полосу длиной 2 - 3 см. Слой крови не должен быть слишком толстым, так как в последнем случае при высыхании он превращается в корочку и легко отстает от стекла. После изготовления толстых капель их высушивают, положив стекла на горизонтальную поверхность. Для ускорения высыхания стекол их можно помещать в термостат (30 - 35оС). Нужно предохранять стекла от запыления, а также от мух и тараканов, которые охотно поедают влажную и подсохшую кровь.

Мазки крови высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают. Для фиксации применяют метиловый спирт (экспозиция 3 - 5 мин), этиловый 96o спирт (15 мин) или смесь Никифорова: абсолютный этиловый спирт и эфир в равных соотношениях (20 мин). Фиксатор можно наливать прямо на стекло, находящееся в горизонтальном положении, но лучше пользоваться специальными стаканчиками, в которые погружают сразу несколько препаратов. Фиксированные мазки высушивают на воздухе и окрашивают по методу Романовского - Гимза.

16. профилактика анаф.шока (проба)

Анафилакти́ческий шок или анафилакси́я — аллергическая реакция немедленного типа, состояние резко повышенной чувствительности организма, развивающееся при повторном введении аллергена (чужеродных белков и сывороток, медикаментов, при укусе перепончатокрылых и других). Одно из наиболее опасных осложнений лекарственной аллергии, заканчивающееся примерно в 10-20 % случаев летально.

Причины анафилактического шока

Анафилактический шок стал часто наблюдаться при терапевтическом и диагностическом вмешательствах — применении лекарств (пенициллина и его аналогов, стрептомицина, витамина B1, амидопирина, анальгина, новокаина), иммунных сывороток, йодсодержащих рентгеноконтрастных веществ, при накожном тестировании и проведении гипосенсибилизирующей терапии с помощью аллергенов, при ошибках переливания крови, кровезаменителей и др.

Профилактика анафилактического шока: Профилактика развития анафилактического шока заключается прежде всего в избегании контактов с потенциальными аллергенами. Больным с известной аллергией на что-либо (лекарства, пищу, укусы насекомых) любые препараты, обладающие высоким аллергенным потенциалом, следует либо вообще избегать, либо назначать с осторожностью и только после подтверждения кожными пробами факта отсутствия аллергии на конкретный препарат.

16. взятие материала (зев, нос, мокрота) для мкрб исследования

Мазок из носа.

1. Кожу в окружности наружных отверстий смазать 60% спиртом.

2. Большим пальцем левой руки приподнять кончик носа пациента.

3. Осторожно, не касаясь наружных стенок носа ввести тампон сначала в один носовой проход, затем в другой.

4. Наклеить на пробирку направление.

5. Отправить мазок в лабораторию немедленно, пока не высох.

Мазок из зева.

1. Усадить пациента лицом к свету.

2. Если мазок нужно взять у ребёнка, то его нужно усадить на колени к матери, она зажимает голову ребёнка, положив ладонь на лоб.

3. Зажечь спиртовку.

4. Взять в левую руку шпатель, а в правую тампон ( вынуть не касаясь наружных стенок пробирки)

5. Шпателем быстро придавить корень языка.

6. Тампон в правой руке осторожно снять слизь с дужек миндалин и задней стенки глотки. ( не касаясь слизистой щёк и языка)

7. Края пробирки провести над пламенем спиртовки.

8. Осторожно вставить тампон, не прикасаясь к стенкам пробирки.

9. На пробирку наклеить направление и отправить в лабораторию.

Примечание: мазок проводится до еды или через 2 часа после еды. При наличии повреждений, материал забирается на грани здоровой и поражённой ткани.

Мокрота:

Cвободно отделяемая мокрота (предпочтительно утренняя порция).

1. перед сбором пробы пациент, если это возможно, должен почистить зубы и сполоснуть рот и горло водой;

2. предупредите пациента, чтобы он не собирал в контейнер слюну или носоглоточное отделяемое;

3. проба мокроты, полученная в результате откашливания, собирается в стерильный пластиковый контейнер с завинчивающейся крышкой и пробу передают в лабораторию;

4. хранение образца допускается в течение суток с момента сбора при температуре 2-8 С.

16. цикл обаботки изд.мед. назнач.

17. взятие материала – кровь

приготовить: халат, маску, перчатки, 70% спирт, стерильные ватные шарики, стерильный шприц, спиртовку, жгут, стерильный лоток, лоток для сбора использованного материала, питательные среды, бланки направления.

Кровь засевают у постели больного.

1. Вымыть руки

2. Надеть перчатки и обработать их шариком со спиртом.

3. Выполнить венепункцию с помощью стерильного шприца и иглы.

4. Набрать 20 мл крови

5. Снять пробку с флакона пит средой и выпустить в него 10 мл крови.

6. Обжечь пробку над спиртовкой и закрыть флакон.

7. На флаконы наклеить направления и отправить в лаб.

16. кал, рвотные массы

приготовить: перчатки, клеёнку, штатив, пробирки с консервантом (30% глицериновая смесь), стер. шпатели, бланки направлений.

калл

1. Из судна берётся 3-5 г испражнений. Целесообразно брать последние порции кала, если поражается тонкий кишечник.

2. У грудных детей материал берётся с клеёнок.

3. Помещают их в пробирку с глицериновой смесью.

4. Выписывают направление и доставляют в лабораторию.

Промывные воды желудка.

Приготовить: стерильные банки с крышками, перчатки, халат, фартук, полотенце, кружка эсмерх, толстый желудочный зонд, кипячёная вода 10 л, таз, ведро, клеёнки, бланки направлений.

1. Собрать промывные воды желудка в стерильную банку.

2. Они берутся из 1-ой порции

3. Пищевые продукты тщательно перемешиваются.

4. Собранный материал засевают на пит.среды.

5. Дальнейшее исследование ведётся по обыкновенной схеме.

16. требования к проведению прививок

помещение должно быть подготовлено:

- вымыты полы и мебель с применением дез.средств.

- столы для инъекций д/б покрыты стерильными или проглаженными простынями

- нельзя проводить прививку в помещении, где идет прием больных

- ЗАПРЕЩАЕТСЯ ВЫПОЛНЕНИЕ ПРИВИВОК МЕДРАБОТНИКАМИ, СТРАДАЮЩИМИ ПРОСТУДНЫМИ ИЛИ ГНОЙНИЧКОВЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

- перед началом провести определение годности препаратов:

-- в каждой упаковке с препаратом д/б аннотация с информацией о названии, способе употребления, количество препарата в мл., дозах, активность в единицах, номер серии, номер и дата гос.контроля, срок годности.

- доброкачественность зависит от правильности хранения, предупреждения воздействия на препарат высоких температур, (от +3 до +8 - норма)

- браковать препараты:

-- без этикеток

-- в поврежденных упаковках (трещины в ампулах, флаконах)

-- с неразбивающимися хлопьями, изменившим цвет, с посторонними включениями

-- с истекшим сроком годности

- на забракованные препараты составить акт: наименование, количество, серию, контрольный номер, срок годности, причину негодности.

16. вакцины, класс. и применение

17. сыворотка. классиф. и применен

18. значение применения антибиот.

    • антибиотики – химиотерапевтические препараты или аналоги, спбные подавлять рост микроорганизмов

    • в зав. от источника – 6 групп: из грибов, актиномицетов, бактерий, животьные, растительные, синтетические

    • три способа получения: химический, биологический, комби

    • по направленности в зав. от природы микробов: антибактериальные, противогрибковые, антипротозойные, противовирусные, противоопухолевые

    • отдельные группы: противолепрозные, противосифилитические, противотуберкулезные

    • по типу действия: бактерицидное, бактериостатическое

    • по спектур действия: широкое, узкое

    • могут оказывать небл. побочное действие: токсические реакции, дисбиозы, аллергиечские, иммунодепрессивные.

19. состав и назнач. дифференц. и обогат. сред

Дифференциально-диагностические позволяют отличить один вид микроба от другого по ферментативной активности.

При росте бактерий на дифференциально-диагностических средах протекают химические процессы, обусловленные наличием у микробной клетки различных ферментов. Одни из них способны расщеплять белки, другие — углеводы, третьи — вызывать реакции окисления и восстановления и т. д. Благодаря действию ферментов в дифференциально-диагностической среде происходят соответствующие изменения.

Обогатительная среда:

16. элективной и синтетической сред

Для выделения особого вида микробов. Добавление соли, антибиотиков и.т.д ЖСА ( Желточно солевой агар)

Синтетические – готовят из органических и неорганических веществ.

ТЕОРИЯ