9. Гемагглютинации и связывание комплемнента

   • это непрямая реакция агглютинации (гемагглютинации)

   • основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхностями АТ или АГ.

   • Эритроцитарные диагностикумы с АТ используются для выявления АГ в сыворотке больного

   • в случае положительной РНГА происходит склеивание эритроцитов. Осадок фестончатый

   • в случае отрицательной – осадок плотный круглый, края ровные

   • Скорость и выраженность этого процесса зависят от числа эритроцитов, концентрации антител, рН, температуры и ионной силы раствора.

   • Агглютинация происходит, когда силы связывания превышают силы отталкивания, обусловленные отрицательным зарядом клеточной поверхности эритроцитов.

   • Агглютинация также зависит от доступности, т. е. количества и локализации молекул антигена на поверхности эритроцита.

   •  Антигены системы AB0( эритроцитарные антигены A и В ) находятся на внешней поверхности клеточной мембраны и поэтому легко связываются с антителами, а антигены системы Rh - в ее толще.

   • Доступность таких антигенов повышается при обработке эритроцитов ферментами.

• Реакции связывания комплемента основаны на активации комплемента комплексом АТ-АГ (реакция лизиса, связывания, радиального гемолиза)

• Лизиса – растворение клеток под действием лизинов АТ, комплемент – сыворотка крови морской свинки

• Связывания (РСК) – если АТ-АГ не образуется, комплемент остается свободным.

• 1я фаза – инкубация смеси

• 2я – индикаторная – выявление свободного комплемента- антиген смешивают с антителами; иными словами весь метод РСК сводится к двум этапам:

• - к образовавшимся комплексам антиген - антитело добавляют известное количество комплемента, который связывается с этими комплексами;

• - количество несвязанного комплемента оценивают в реакции гемолиза с эритроцитами барана.

• реакция с исп. меченых АТ: АГ- обработанные имм/ми сыворотками с АТ, мечеными флюорохромами, спбны светиться в УФ-лучах.

10. Метод определения чувств. Микроорганизмов

- культуру засевают «газоном» в чашку Петри на МПА

- на поверхность МПА накладывают бумажные диски пропитанные АБП

- ставят в термостат на 24 часа, после подводят итог по светлым зонам задержки роста вкруг колоний

- по диаметрам зон судят о степени чувствительности к АБП

до 10 мм. – слабая

более 10 мм. – высокая

нет зоны – устойчив к АБП

11. принцип выделения чистых кульур

1 день – каплю втирают в поверхность среды на 2-3 чашки для получения изолированных колоний

посевы ставят в термостат

2й день – изучают динамику роста. к/ж колонию переносят на косой агар

посев ставят в термостат

3й день – изучают характер роста. делают мазок. окрашивают.микроскопируют, ч/б убедиться, что культура чистая.

выделенная культура – штамм.

для выделения гемокультуры – засевают в жидкую среду для подращивания, т/к в крови мало возбудителей

для выделения ЧК из мочи, промывных вод желудка – предварительно центрифугируют и засевают осадок.

далее – обычным способом

12. методы стерилизации. контроль стерильности

Физические методы. Автоклавирование.

Обеспечивается паровыми стерилизаторами различных габаритов с различной степенью автоматизации. В паровых стерилизаторах создаётся высокая температура до 138˚ и высокое давление до 2,5 атм., благодаря которому обеспечиваются условия для вытеснения воздуха из всей стерилизационной камеры, включая прослойку между складками белья и перевязочного материала.

Сухожаровой шкаф.

Стерилизатор для воздушного метода стерилизации .

Изделия из корразионнонестольйкого металла, стекло.

Химические методы.

Перекись водорода.

Для стерилизации используется 6% перекись водорода - экспозиция 180 минут., температура 50С; при полном погружении для стерилизации изделий из полимеров, резины, стекла и коррозийно-нестойких металлов экспозиция - 360 минут при температуре 18С.

Дезоксон-1.

Бесцветная жидкость с характерным запахом уксусной кислоты, хорошо растворима в воде, спирте. Выпускается во флаконах из тёмного стекла и при температуре 10 С сохраняет активность в течении года.

Для стерилизации используют рабочие растворы 1%, для чего в водопроводной воде разводят 200 мл препарата в 800 мл воды, экспозиция 45 минут при температуре 18 С, р-р годен одни сутки, используется только один раз.

Простерилизованные изделия промывают в стерильной воде погружением на 5 минут с троекратной сменой воды, а затем помещают в стерильную стерилизационную коробку на стерильную простыню. Хранить можно трое суток.

Дезоксон-1 обладает выраженным коррозионным действием, а поэтому не всегда пригоден для стерилизации инструментов. Работают, соблюдая меры предосторожности.

Контроль стерильности.

Физические, химические, биологические способы.

Физические методы : контроль работы приборов, характеризующих температуру, время, давление, позволяющих строго соблюдать установленный режим стерилизации, который обеспечивает гибель микробов.

Химический контроль.

Осуществляется косвенно по изменению окраски химических индикаторов(индикаторные бумажки, порошки, жидкости - бензойной кислоты, мочевины, запаянная в ампулы), которые помещаются на поверхности и глубине стерилизуемого объекта.

Биологический контроль.

Помещение внутрь стерилизуемых объектов биотестов, приготовленных из термоустойчивых спорообразующих бактерий.

13. общая схема сложных методов окраски

способы окрашивания поствитальных препаратов (фиксированных) разделяют на простые и сложные.

к сложным относятся: дифференцированный способ Грама, выявление кислотоустойчивости по Цилю — Нельсону, определение волютиновых зёрен по Леффлеру или Нейссеру, дифференцирующий способ Романовского — Гимзы, негативно-позитивный способ определения капсулы по Гинсу — Бурри, выявление спор по Пешкову или Цилю — Нельсону

14. метод окраски по Цилю-Нельсену

Метод окраски микроорганизмов для выявления кислотоустойчивых микобактерий (возбудителейтуберкулёза, микобактериозов, лепры), актиномицетов и других кислотоустойчивых микроорганизмов. Кислотоустойчивость микроорганизмов обусловлена наличием в их клетках липидов, воска иоксикислот. Такие микроорганизмы плохо окрашиваются разведёнными растворами красителей. Для облегчения проникновения красителя в клетки микроорганизмов нанесённый на препарат феноловый фуксин Циля подогревают над пламенем горелки. Окрашенные микроорганизмы не обесцвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и спирта.

Метод назван именами немецких медиков — микробиолога Франца Циля(1857—1926) и патологоанатома Фридриха Нельсена (1854—1898), которые разработали его в 1882—1883 гг.