5. Приготовление и микроскопирование тонкого мазка

При изготовлении мазков палец держат проколом вверх. К выступившей капле крови прикасаются нижней поверхностью предметного стекла, отступив на 1,5 - 2 см от узкого края. Затем стекло переворачивают, берут в левую руку, а в правую - предметное стекло с шлифованными краями и сточенными уголками, Его узким краем под углом 45о касаются капли крови. Кровь растекается по краю шлифованного стекла, после чего быстрым движением этого стекла вперед делают мазок (рис.1). Последний должен быть тонким (эритроциты не должны налегать друг на друга) и располагаться в средней части стекла, не доходя до его боковых сторон и противоположного края, так как пораженные эритроциты в значительной степени группируются по периферии мазков.

6. основные этапы бактериологиического метода лабораторной диагностики

7. Требования, предъявляемые к пит.Средам

- должны содержать вещества для построения микробной клетки

-- азот, углерод, водород, кислород

-- микроэлементы железо, молибден, барий, хром, цинк, медь

-- факторы роста, витамины, гормоны

- д/иметь опред.концентрацию водородных ионов для измерения которой служит водородный показатель рН. для большинства микроорг. рН 7,2-7,4 (исключая холерный вибрион – 8,6 и тубер.палочка 6,2-6,8)

- среда изотоническая для клетки – давление в ней акое же как в клетке

- среда влажная и не очень вязкая, т.к питание микробов осущ. за счет осмоса и диффузии

- среда стерильная, т/к присутствие посторонних микрорг. препятствует росту изучаемого и определению его совйств

8. Постановка серологических реакций: агглютинации и преципитации

Серология (от лат. serum — сыворотка), наука о свойствах сыворотки крови. Обычно под серологией понимают раздел иммунологии, изучающий взаимодействие антител сыворотки с антигенами.

Серологические реакции могут быть прямыми (двухкомпонентными) — агглютинация, пассивная гемагглютинация, преципитация и др., и косвенными (трёхкомпонентными) — реакция нейтрализации (например, микроба), реакция торможения гемагглютинации.

Агглютинация — склеивание и выпадение в осадок из однородной взвеси бактерий, эритроцитов и др. клеток, несущих антигены, под действием специфических веществ — агглютининов, в роли которых могут, например, выступать антитела или лектины.

происходит связывание АТ корпускулярных АГ

• Реакцию агглютинации применяют для определения групп крови, идентификациивозбудителей инфекционных заболеваний 

• РА проявляетмся в виде хлопьев или осадка

• используют для определения АТ в сыворотке крови больных

• Для идентификации возбудителя

• имеются сл. виды: развернутая, ориентировочная и непрямая

• для определения АТ ставят развернутую: к разведениям сыворотки крови в электролит добавляют взвесь убитых микробов (диагностикум) , ч/з неск/ко часов отмечают наиб.титр сыворотки

• для идентификации проводят ориентировочную на предметном стекле

• обяз условие для любой – контроль АТ и АГ, для этого исп. натрий хлор вместо одного из ингрид.

• реакции агглютинации, кот.нам давали – это «на стекле» и «развернутая»

на стенке. компоненты: АТ, АГ, изотонический р-р.

1. на обезжиренную стенку нанести две капли сыворотки и 1 каплю изотонического раствора, ч/б между каплями было расстояние

2. АГ петлей или пипеткой вносят в одну из капель сыворотки и в каплю изотонического р-ра. Размешивают. Капля сыворотки без ра-ра – это контроль.

3. реакция течет 2-3 минуты. положительная, если:

- контроль прозрачный.

- в капле с антигеном появились хлопья

• реакции преципитации: формирование и осаждение комплекса преципитиногена с преципитином, АГ со специф Ателами

• осадок комплекса АГ-АТ – преципитат

• в агаре и кольцепреципитации

реакция преципитации в агаре.

• особенность реакции: взаимодействие АГ и АТ в плотной среде.

• Образуется преципитат. Он дает в толще среды мутную полосу. используется при изучении токсинообразования у возбудителя дифтерии

кольцепреципитация

• АГ, АТ и изот.р-р.

• - в спец.пробирки пастеризованной пипеткой вносят 5-6 капель сыворотки (не попадать нас тенки!!)

• - на сыворотку осторожно по стенке внести 5-6 капель АГ. оставить на 30 минут. Если реакция полож, то на границе АГ-АТ образуется кольцо.

• НЕЛЬЗЯ намазывать сыворотку на АГ, т.к. отн.плотность сыворотки больше, и сыворотка опустится на дно. границы между жидкостями не будет.