Опыт 1. Биуретовая реакция (реакция Пиотровского).

Биуретовая реакция положительны с белками и пептидами, имеющими не менее двух пептидных связей ( --СО—NH--). Эта реакция основана на способности пептидной группы белков и полипептидов образовывать в щелочной среде с ионами Cu²⁺ комплексное соединение фиолетового цвета с красным или синим оттенком в зависимости от количества пептидных связей.

Раствор природного белка дает сине-фиолетовое окрашивание, а продукты его гидролиза – пептиды – красно-фиолетовое.

К 1-2 мл раствора белка добавляют 1-2 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия и 1-2 капли 1%-ного раствора сульфата меди и перемешивают. Содержимое пробирки приобретает сине-фиолетовое окрашивание.

Напишите уравнение реакции образования комплексного соединения.

Опыт 2. Нингидриновая реакция.

Нингидриновая реакция характерна для α- аминогрупп, которые присутствуют в природных аминокислотах и белках. Сущность реакции состоит в образовании окрашенного соединения – продукта конденсации двух молекул нингидрина с молекулой аммиака, образовавшейся из NH₂ – группы при гидролизе аминокислот.

Белки, полипептиды и свободные аминокислоты дают с нингидрином сине-фиолетовое или розово-фиолетовое окрашивание.

К 0,2-0,5 мл раствора белка прибавляют 5 капель 0,5%-ного водного раствора нингидрина и нагревают до кипения. Появляется сине-фиолетовое или розово-фиолетовое окрашивание.

Напишите уравнение реакции взаимодействия аминокислоты с нингидрином с образованием окрашенного продукта конденсации.

Опыт 3. Ксантопротеиновая реакция (реакция Мульдера).

Ксантопротеиновая реакция позволяет обнаружить в молекуле белка циклические аминокислоты, содержащие ароматические кольцо. Реакция основана на способности присутствующих в молекуле белка ароматических аминокислот (тирозина, триптофана и фенилаланина) образовывать с концентрированной азотной кислотой при нагревании динитропроизводные соединения желтого цвета. В щелочной среде они переходят в хиноидные структуры, имеющие оранжевое окрашивание.

К 2-3 мл раствора белка приливают 0,5-1 мл концентрированной азотной кислоты. Выпадает осадок, который при нагревании приобретает желтую окраску. Если после охлаждения в пробирку добавить 1-2 мл концентрированного гидроксида натрия или аммиака, то желтое окрашивание переходит в оранжевое вследствие превращения нитропроизводных циклических аминокислот в соли хиноидной структуры.

Напишите уравнение реакции нитрования тирозина с образованием натриевых солей динитротирозина хиноидной структуры.

Опыт 4. Реакция Миллона.

Реакция Миллона позволяет обнаружить в белке тирозин. Реакция обусловлена способностью тирозина при нагревании с реактивом Миллона образовывать ртутную соль динитротирозина, окрашенную в красно-коричневый цвет.

К 2-3 мл раствора белка приливают 1-2 мл реактива Миллона (раствор ртути в азотной кислоте с небольшим количеством азотистой кислоты). Появляется белый осадок, который при нагревании приобретает красно-коричневый цвет.

К раствору белка не следует добавлять избыток реактива Миллона, так как он содержит азотную кислоту, которая при взаимодействии с белком может дать желтое окрашивание (ксантопротеиновая реакция), маскируя реакцию Миллона.

Напишите уравнение реакции образования ртутной соли динитротирозина хиноидной структуры.