- •Методы исследования в микробиологии
- •Техника безопасности при работе с биологическим материалом
- •Характеристика уровней биобезопасности
- •Забор, хранение и транспортировка материала для микробиологического исследования
- •Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования (бсми)
- •1 Этап бсми. Забор, хранение и транспортировка материала.
- •2 Этап бсми. Приготовление микропрепаратов.
- •1) Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в убитом состоянии:
- •Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в живом состоянии:
- •Сложные методы окраски клеточных структур бактерий
- •Сравнение электронного и светового микроскопов
- •4 Этап бсми. Заключение.
- •Культивирование микроорганизмов на питательных средах
- •Классификации питательных сред
- •I. По происхождению:
- •II. По составу:
- •III. По консистенции:
- •IV. По назначению:
- •Наиболее часто используемые индикаторы рН в питательных средах
- •Среды для получения изолированных колоний.
- •Среды для накопления чистой культуры.
- •Среды для идентификации микроорганизмов.
- •Признаки колоний микроорганизмов
- •Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
- •I. Методы механического разобщения бактерий.
- •Методы выделения чистых культур облигатно-анаэробных микроорганизмов
- •Культуральный (бактериологический) метод исследования
- •I. Этапы блми при выделении чистой культуры аэробов и факультативных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •3 Этап.
- •Признаки, учитываемые при идентификации микроорганизмов (критерии вида)
- •4 Этап.
- •II. Этапы блми при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •Биохимическая идентификация микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов без выделения чистой культуры
- •Принципы молекулярно-генетического анализа
- •Классификация молекулярно-генетических методов
- •Методы, основанные на изучении фрагментов днк.
- •Методы, основанные на гибридизации нуклеиновых кислот.
- •III. Методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
- •Характеристика стадий пцр
- •IV. Методы анализа амплифицированных фрагментов.
- •V. Методы, основанные на определении последовательности нуклеотидов в днк, рнк и аминокислот в белках.
- •VI. Методы, основанные на модификации генетической информации.
- •Характеристика штаммов e. Сoli, участсвующих в процессе конъюгации
- •Определение факторов патогенности бактерий
- •5. Капсула.
- •7. Изучение неизвестных токсинов и других факторов патогенности микроорганизмов, механизмы действия которых недостаточно изучены.
- •Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Классификация методов определения
- •Основные понятия
- •Дискодиффузионный метод
- •Пропорционален антибиотикочувствитель-ности микроорганизма
- •Метод разведений в агаре
- •Метод разведений в жидких средах
- •Ускоренный метод
- •Автоматизированнный метод с использованием автоматических микробиологических анализаторов
- •Генетические методы
- •Состав питательной среды:
- •Величина посевной дозы и состояние тест-микроорганизмов (инокулюм-эффект):
- •Условия инкубации:
- •Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •1 Этап эсми. Взятие и обработка материала.
- •2 Этап эсми. Выбор и заражение лабораторного животного.
- •3 Этап эсми.
- •Общие принципы серологического метода исследования
- •Определение активности гуморального поствакцинального индивидуального или коллективного иммунитета;
- •Определение титров диагностических, лечебных и профилактических сывороток;
- •I. Достоинства слми:
- •II. Недостатки слми:
- •Наличие ложных результатов:
- •Общие принципы аллергологического метода исследования
- •I этап алми. Сбор аллергологического анамнеза с целью:
- •Достоинства алми:
- •II. Недостатки алми:
- •Оглавление
II. По составу:
1. Минимальные соответствуют минимальным потребностям микроорганизмов в питательных веществах. Минимальные среды используют в генетических исследованиях.
2. Полные содержат все необходимое для роста бактерий.
III. По консистенции:
Жидкие (мясо-пептонный, сахарный, кровяной, желчный бульоны, пептонная вода, молоко).
Полужидкие - содержат 0,5% агара (полужидкий агар).
Плотные – содержат уплотнители, придающие среде желеобразную консистенцию. В качестве уплотнителей могут использоваться:
агар (по-малайски желе) – очищенный полисахарид из морских водорослей, который добавляют к жидким средам в концентрации 1–3% (обычно 15–20г/л). Плавится при 1000С, застывает ниже +450С; разлагают его немногие бактерии;
желатин - он разжижается многими микроорганизмами и имеет низкую температуру плавления (26300С), поэтому редко используется в качестве уплотнителя;
силикагель - используется в случаях, когда требуются плотные среды, не содержащие органических компонентов (для хемолитотрофов).
Свёрнутые плотные среды, содержащие сыворотку крови или яичный белок, которые в процессе температурной коагуляции приобретают плотность.
Сыпучие пшено, отруби и др., используют для длительного хранения микроорганизмов на поверхности среды.
IV. По назначению:
Общего назначения, основные (МПБ, МПА). На них растут многие нетребовательные микроорганизмы (псевдомонады, энтеробактерии, стафилококки).
Элективные (селективные, избирательные) содержат вещества, подавляющие рост сопутствующей микрофлоры и усиливающие рост определенных видов или родов микроорганизмов. В качестве селективных добавок используют антибиотики, антисептики (фурагин), анилиновые красители (феноловый красный, метиленовый синий, эозин, малахитовый зеленый), соли (теллурит калия, 4-9% NaCl, селенит натрия), желчь. Примеры элективных сред: для стафилококков желточно-солевой агар, для синегнойной палочки – фурагиновый агар.
Дифференциально-диагностические позволяют отдифференцировать по внешнему виду колоний и биохимической активности одну группу микроорганизмов от другой при посеве биологического материала со смешанной микрофлорой. Содержат углеводы, индикаторы рН, селективные добавки. Примеры дифференциально-диагностических сред: для энтеробактерий Эндо, Левина, Плоскирева, для клебсиелл лактозо-бромтимоловый агар с пенициллином, для Clostridium difficile фруктозо-циклосерин-цефокситиновый агар.
Индикаторные. В состав таких сред кроме индикатора рН (табл. 6) входят углеводы, либо аминокислоты, при разложении которых изменяется рН и как следствие этого цвет среды.
Таблица 6
Наиболее часто используемые индикаторы рН в питательных средах
Название индикатора |
Окраска индикатора в зависимости от значения рН |
||
щелочное |
нейтральное |
кислое |
|
Андреде |
бесцветный |
бесцветный |
красный |
Бромтимоловый синий |
бирюзовый |
зеленый |
желтый |
ВР (водный голубой+розоловая кислота) |
малиновый |
бесцветный |
синий |
Феноловый красный |
малиновый |
красный |
желтый |
Изначально рН среды устанавливают 7,2±0,2. Эти среды позволяют изучать биохимические свойства чистых культур микроорганизмов и не обладают селективными свойствами. Примеры индикаторных сред: среды Гисса, Клиглера, Олькеницкого.
Хромогенные. Новый тип диагностических сред, получающий в последнее время широкое распространение в ускоренной диагностике инфекционных заболеваний. На хромогенных средах по цвету колоний можно проводить предварительную идентификацию микроорганизмов (рис. 18).
В состав таких сред, кроме ростовых и селективных компонентов, входит меченый хромогеном субстрат (субстраты). Колонии микроорганизмов, которые разлагают хромогенный субстрат, окрашиваются в определенный цвет. Разработаны хромогенные среды для выделения и предварительной идентификации листерий, сальмонелл, шигелл, E. coli О157, кандид, устойчивых к метициллину стафилококков (MRSA) и др.
Рис. 18. Хромогенная среда CHROMagar OrientationTM позволяет быстро идентифицировать основных возбудителей инфекций мочевых путей
V. По цели использования в схеме бактериологической диагностики инфекционных заболеваний: