Вассермана реакция

Вассермана реакция (медицинская), метод распознавания сифилиса при помощи серологической реакции (см. Серодиагностика). Названа по имени А. Вассермана. В. р. основана на свойстве кровяной сыворотки больных сифилисом образовывать с соответствующим антигеном комплекс, адсорбирующий комплемент — часть нормальной сыворотки; антигеном служат эритроциты бараньей крови, антителом — сыворотка крови человека. Если при добавлении гемолитической сыворотки не происходит растворения эритроцитов (гемолиза), В. р. считается положительной (сифилис есть), при появлении гемолиза В. р. отрицательная (сифилиса нет). В. р. позволяет установить заболевание сифилисом при отсутствии его клинических проявлений; она служит критерием эффективности лечения. Исследование крови на В. р. проводится обязательно у беременных для профилактики врождённого сифилиса у детей, у доноров и т.д., В. р. ставят перед снятием с учёта больных сифилисом и при выдаче им разрешения на брак. Положительная В. р. может наблюдаться и при некоторых заболеваниях несифилитического происхождения (проказа, малярия, сыпной, возвратный и брюшной тифы, оспа, скарлатина, грипп, корь, бруцеллёз, вирусное воспаление лёгких, инфекционный мононуклеоз и т.д.), а также при некоторых физиологических состояниях (при менструации, во второй половине беременности у 2% беременных), при приёме внутрь лекарственных препаратов — ложноположительные реакции. Поэтому в случае сомнения необходимо повторное исследование.

Гемагглютинации реакция торможения

серол. реакции, основанные на торможении агглютинации эритроцитов. Применяют 2 вида Г. т. р: реакция торможения активной (РТГА) и пассивной (РТПГА) Гемагглютинации.РТГА используют для серодиагностики вирусных инфекций и типирования неизвестных вирусов. В первом варианте к сериям двукратных разведении с-к б-ного, взятых в начале болезни и спустя 10-14 дней в объеме 0,25 мл, добавляют по 0,25 мл стандартного вирусного диагностикума. После часовой экспозиции при комнатной температуре в каждую пробирку (лунку) доливают по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. Через 30 - 60 мин в обоих рядах определяют последние разведения с-к, в к-рых отмечено торможение (отсутствие) Гемагглютинации. В случае нарастания титра Ат в 4 раза и более дают положительный ответ, в остальных случаях - отрицательный. Для типирования вирусов готовят серии двукратных разведении стандартной типовой с-ки в объеме 0,25 мл, к каждому разведению добавляют равный объем иссл. вирусной суспензии активностью в 4 гемаг-глютинирующие ед. (дозы), выдерживают при комнатной температуре 1 ч и доливают по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. Учет осуществляют так же, как и в предыдущем варианте. Вирус признают идентичным с-ке, если РТГА достигает титра или 1/2 титра стандартной с-ки. К тому и др. варианту ставят 3 контроля: с-ки, вируса, эритроцитов. РТПГАобычно проводят для обнаружения бактериальных, грибковых, протозойных Аг (гаптенов) в иссл. материале. Она высокочувствительна, специфична, но трудоемка в постановке. РТПГА осуществляют также в 2 этапа. На 1-м этапе к серии двукратных разведений иссл. на Аг материала добавляют равный (обычно 0,25 мл) объем стандартной иммунной с-ки, взятой в рабочей дозе. Пробирки выдерживают в термостате 2 ч. При наличии соответствующего с-ке Аг в материале имеет место связывание Ат и при последующем добавлении эритроцитарного диагностикума в ряде пробирок (и в зависимости от количества Аг) происходит торможение агглютинации сенсибилизированных эритроцитов. Опыт сопровождают контролями с-ки, эритроцитов и материала.

Гемагглютинации реакция активная

процесс склеивания эритроцитов вирусной суспензией. Применяют для индикации вирусов в среде. Для качественного обнаружения вируса к капле вируссодержащей суспензии добавляют каплю 1 % суспензии отмытых куриных эритроцитов В положительной реакции вирусы адсорбируются на эритроцитах, что через несколько минут проявляется образованием агглютинатов. В контроле каплю суспензии эритроцитов смешивают с каплей физраствора. Для количественной характеристики из вируссодержащей суспензии готовят несколько двукратных разведении в лунках плексигласовой панели в объеме 0,5 мл и к ним доливают по 0,5 мл 1% суспензии куриных эритроцитов. Результат учитывают после 40-минутной экспозиции при комнатной температуре, ориентируясь на характер осадка. В контроле и при отрицательной реакции осадок эритроцитов имеет вид небольшого плотного диска с ровными краями. В положительном случае осадок занимает большую часть дна пробирки, лунки, он рыхлый с фестончатыми краями. Рассчитывают титр, выражаемый в гемагглютинирующих единицах.

РЕАКЦИЯ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ, РНГА (Indirect hemagglutination test)

- метод выявления антигенов и антител, основанный на способности эритроцитов, на поверхности которых предварительно адсорбированы антигены или антитела, агглютинироваться в присутствии гомологичных сывороток или соответствующих антигенов.

При обнаружении антигенов реакция обозначается обратной пассивной гемагглютинацией - РОПГА (reversed passive hemagglutination test), а при обнаружении антител - пассивной гемагглютинацией - РПГА (passive hemagglutination test). РНГА нашла широкое применение для выявления серологических маркеров инфицирования вирусом гепатита В, особенно HBsAg и антител к нему.

В настоящее время разработаны различные методы изготовления эритроцитарных диагностикумов, отличающихся по способам сенсибилизации эритроцитов (с помощью танина, глютарового альдегида, хлористого хрома, риванола и т.п. ), их видовой принадлежности (человека, барана, курицы, индюка и т. д. ), вариантам постановки реакции (в планшетах для микротитрования, в пробирках, капиллярах и т. д. ) и учета результатов (визуальный и инструментальный). Эритроцитарные диагностикумы для выявления HBsAg и анти-HBs выпускаются многими предприятиями и фирмами как у нас в стране, так и за рубежом.

Чаще РНГА проводится в планшетах для микротитрования, в которых предварительно приготовляются разведения исследуемой сыворотки и контрольных образцов. После внесения эритроцитарного диагностикума и инкубации проводится учет результатов реакции. Положительными считают образцы, в которых происходит агглютинация эритроцитов, имеющая вид перевернутого “зонтика”. При отрицательной реакции — эритроциты оседают на дно лунки в виде кольца или диска.

Для подтверждения специфичности полученных результатов реакция ставится как с “опытным” эритроцитарным диагностикумом (т. е. эритроциты, сенсибилизированные антигеном или антителами), так и с “контрольным” диагностикумом (т. е. эритроциты не сенсибилизированы антигеном или антителами). Наличие позитивной реакции с “контрольным” диагностическим препаратом свидетельствует о ложнопозитивной реакции. Для устранения неспецифических реакций исследуемую сыворотку обрабатывают несенсибилизированными эритроцитами. Обязательным условием проведения РНГА является реакция нейтрализации, т. е. конфирмационный тест.

По сравнению с такими методами, как РПГ, ВИЭФ и РСК, реакция непрямой гемагглютинации обладает более высокой чувствительностью (в 200 - 400 раз). Так, HBsAg в РПГА может быть выявлен в концентрациях 6-10 нг/ мл. Простота проведения реакции и экспрессность (20 - 30 минут) определили широкое применение данного метода в службе переливания крови для выявления HBsAg.

Кроме эритроцитарных диагностикумов для выявления HBsAg и анти-HBs разработаны диагностические препараты и для вы- явления анти-НВс, анти-НВс класса IgM (твердофазный вариант), HBeAg, антигена вируса гепатита А и антител к нему, однако, все они не нашли применения в практическом здравоохранении.