2.2. Живые вакцины

2.2.1. Требования, предъявляемые к штаммам для изгото­вления живых вакцин.

Для изготовления живых вакцин используют селекциони­рованные естественные, аттенуировайные и гетерологические штаммы вирусов.

Естественные (выделенные из природы) апатогенные или слабовирулентные штаммы — это естественные, спонтанные мутанты, утратившие способность вызывать заболевание, но сохранившие иммуногенные свойства, Они, как правило, ин­терферируют с неослабленными, эпизоотическими штаммами. К этой категории относятся, например, вакцинные штаммы В|, Ла-Сота и Бор 74 ВГНКИ вируса болезни Ньюкасла.

Аттенуированные, т. е. ослабленные экспериментатором штаммы. Это индуцированные мутанты. Их обычно получа­ют в лабораториях путем целенаправленного воздействия на эпизоотические штаммы различными, физическими и химиче­скими мутагенами или путем пассажей через необычные (ма­ловосприимчивые) биологические системы. При пассажах на животных успех во многом зависит от, выбора метода за­ражения. Так, например, Луи Пастер, путем серийных ин-трацеребральных пассажей (133) уличного вируса бешен­ства на кроликах получил вакцинный штамм, известный под названием вирус «фикс».

Путем пассажей на кроликах были получены вакцинные штаммы вирусов чумы кр. р. скота и классической чумы сви­ней.

В результате серийных пассажей на мышах получены вак­цинные штаммы вирусов гриппа и ящура.

Путем пассажей на куриных эмбрионах получены вак­цинные штаммы вирусов болезни Ауески, чумы плотоядных, гепатита утят, инфекционного ларинготрахеита кур.

После длительного пассирования в культуре клеток полу­чены вакцинные штаммы вирусов чумы кр. р. скота, инфек-

ционного ринотрахеита, парагриппа, и вирусной диареи кр. р. скота, ящура. .

Отбор мутантов ведут на основе знания генетических при­ знаков (маркеров). j

Выделение мутантов облегчается при использовании кло­пов вирусов, полученных из одиночных очагов (оспин, бля­шек) и создания условий, при которых происходит преиму­щественное размножение вирионов с измененной наследст­венностью. Так, например, путем. ,клонирования отбирают термочувствительные мутанты вируса гриппа, которые хоро­шо культивируются, при 28—32°,. но при. 37° их репликация ограничена. При введении в организм они успешно размно­жаются в клетках слизистой оболочки носовой полости, а их репродукция в легких затруднена.

Гетерологические (гетерогенные) штаммы, это штаммы другого вида вируса, но имеющего близкое антигенное род­ство с возбудителем. Так, вирус герпеса индеек защищает, кур от болезни Марека, вирус кори человека в состоянии защи­тить щенков от чумы плотоядных, вирус оспы голубей созда­ет иммунитет против оспы кур, вирус фибромзтоза защищает кроликов от миксоматоза.

В принципе, живые вакцины могут содержать и «дикий» тип- вируса, т. е. неослабленный вирус, но в таком случае его вводят в организм неестественным путем, в результате чего ограничивается репликация вируса в месте введения, вызывается лишь бессимптомная инфекция, заканчивающа­яся выработкой иммунитета. Так, в США для. профилактики аденовирусной инфекции у солдат, используют вирус «дико­го» типа, заключенный в таблетки с покрытием. Когда таб­летка'достигает кишечника, вирус освобождается, но желу­дочно-кишечный тракт не является естественной средой оби­тания аденовируса, он не вызывает заболевание, макрофаги и специализированные антигенпрезентирующие клетки пе­редают информацию Т- и В-лимоцитам, в результате чего обеспечивается иммунный ответ и устойчивость к инфекции.

Любой вакцинный штамм должен быть хорошо изучен, классифицирован, клонирован и паспортизирован. В паспор­те указываются основные генетические признаки, выявляе­мые, постоянно воспроизводимые и контролируемые в процес­се поддержания его жизнеспособности и хранения (остаточ­ная вирулентность, способность репродуцироваться и титры активности в конкретной биологической системе, особенности проявления инфекционного действия,-..спектр гемагглютина-

10

ции, степень чувствительности к физическим и химическим факторам).

Эти признаки должны быть наследственно закрепленны­ми, вакцинные штаммы не должны подвергаться реверсии (возврату в исходное состояние) в том числе и при пассажах на естественно восприимчивых животных. Они не должны вызывать специфического инфекционного процесса у живот­ных после введения им массивных доз вакцинного штамма (в 5—10 раз превышающих иммунизирующую дозу).

Вакцинные штаммы должны обладать способностью при­живляться в организме" естественно восприимчивых животных. От длительности приживаемости обычно зависит продол­жительность и напряженность иммунитета. Высокоиммуно-генные штаммы приживаются в организме на срок от 2 до 4 недель.

Живые вакцины должны создавать напряженный имму­ нитет не менее чем-у 70% однократно вакцинированных жи­ вотных, этого достаточно для создания условий, препятству­ ющих дальнейшему распространению болезни в неблагопо­ лучном стаде. ■ ■

2.2.2. Принципы изготовления живых вакцин.

Вакцинные штаммы сосредоточиваются, поддерживаются, хранятся и контролируются в ВГНКИ ветеринарных препа­ратов (г. Москва). Вакцины готовят на биофабриках,, био­комбинатах или других предприятиях по производству био­препаратов, которые получают вакцинные штаммы- из

вгнки. ■■-.,.

Технология изготовления живых вакцин сводится к куль­тивированию вакцинного штамма в какой-либо биологиче­ской системе (животные, эмбрионы птиц, культуры тканей и клеток). ■

Для предупреждения размножения бактерий, случайно попавших во время сбора и расфасовки вируссодержащего материала, в состав живых вакцин иногда включают анти­биотики (пенициллин, стрептомицин, гентамицин).

Для профилактики контаминации живых авианизирован-ных вакцин микоплазмами и вирусами применяют предин-кубационную термообработку яиц при 42—45° в течение 4 — 7 часов с последующим переводом их на обычный режим ин­кубации, кроме того, для инактивации вирусов лейкозов готовые вакцины выдерживают при 4° не менее 4 недель.

Наиболее желательно для изготовления живых вакцин использовать чистые биологические системы, эмбрионы и

и

эмбриональные культуры клетокяпонских перепелок или кур,, свободных от специфических патогенных факторов (СПФ-жи-вотные).

Выпускаются живые вакцины, как правило, в лиофильно высушенном виде. В процессе высушивания активность ви­русов не должна снижаться более чем на 1,0—1,5 логарифма, что обеспечивается за счет добавок стабилизирующих ве­ществ.

В качестве примера приведем основные данные по изго­товлению сухой лапинизированной авирулентной вирусвак-цины (АСВ) из штамма К против классической чумы свиней.

Для изготовления вакцины на биофабрике используюг кроликов массой 1,8—2,5 кг, которых поставляет специали­зированный зверосовхоз.

Клинически здоровых кроликов заражают внутривенно адаптированным к ним вирусом чумы свиней (2 мл суспензии селезенки ранее инфицированного кролика в физиологиче­ском 0,85%-ном растворе натрия хлорида 1:10).

За зараженными кроликами ведут наблюдение, проводят термометрию. Через 48 час. (иногда позднее — через 3—5 дней) температура повышается до 40 и более градусов, что свидетельствует о накоплении вируса в< органах и крови кро­лика. В таком состоянии кроликов убивают, обескровливают, извлекают селезенку и брыжеечные лимфоузлы. Собранную кровь дефибринируют. Селезенку и лимфоузлы измельчают, гомогенизируют на коллоидных мельницах с разным зазором ножей, добавляя на 1 часть тканей 14 частей дефибриниро-ванной крови, вводят антибиотики, стабилизирующие веще­ства, разливают по ампулам, замораживают путем отнятия влаги с помощью вакуума (лиофильная сушка).

Вакцина проходит контроли, после чего ее этикетируют и выпускают для применения.

При такой технологии из тканей одного кролика получают 425—1000 доз вакцины против чумы свиней.